其他PCR技术

microRNA(miRNA)是一类有大约22个核苷酸组成的非编码小分子RNA，其广泛存在于真核生物中。miRNA在个体发育的不同时期及不同组织中有不同的表达模式，都表明了其在发育和分化中起有重大的调控作用。迄今为此，对miRNA的检测方法主要有Northern Blot 等基于分子杂交的方法，这些方法敏感度低、耗时长、RNA的用量较大。miRNA qPCR Detection Kit采用了国际上公认的核酸检测标准技术――Real ...

一、RT-PCR1. cDNA产量的很低可能的原因：RNA模板质量低对mRNA浓度估计过高反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足同位素磷32过期反应体积过大，不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅最常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系与反应起始时RNA的总量及纯度有关建议在试验中加入对照RNundefined第一链的反应产物在进行PCR扩增时，在总的反应体 ...

Primer of Genetic Analysis: A Problems Approach, 3rd ed Product Details»Book Publisher: Cambridge University Press (01 October, 2007)»ISBN: 052160365X»Book author: Jr, James N. Thompson, Jenna J. Hellack, Gerald Braver, David S. DuricaThis third edition of a student-tested primer prov ...

引言　　聚合酶链反应PCR使不同来源的特异核酸片段的分离及分析发生了革命，但应用PCR分 离，分析特定DNA区域需要了解靶区域的边侧序列，这使扩增局限于已知DNA序列。我 们研究了从复杂的人和其他种DNA混合物中扩增未知DNA序列。特别是，我们应用PCR 分离出了在啮齿类细胞背景中含有人染色体片段的体细胞杂合体中的人DNA。使存留 在杂合子中的人特异区域序列得到分离和鉴定，避免了克隆DNA库和用人特异重复序 列探针他离人序列克隆。 ...

Making the T-vector:1.Digest 5 ug of vector DNA ( pBluescript ＆ pUC18) with a restriction enzyme that generates a unique blunt end site, for example EcoRV or Sma I ( we prefere EcorV for it's stable activity at 37 C) for 2 hours at 37 C.2.Run the digest on a 1% low-melting-point agarose (use TAE as buffer, because the boric ...

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PCR问题的总结pcr产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带　　pcr反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及活性 ④pcr循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模板核酸变 ...

PCR污染与对策PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生.污染原因　　(一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染.　　(二)PCR试剂 ...

http://www.si.edu/archives/ihd/videocatalog/9577.htmSmithsonian Videohistory CollectionTHE HISTORY OF PCR(RU 9577)BackgroundThe Polymerase Chain Reaction (PCR) technique, invented in 1985 by Kary B. Mullis, allowed scientists to make millions of copies of a scarce s ...

分子生物学在医学领域中的应用越来越广泛，基因突变在肿瘤和遗传病的发生过程中的作用也日益受到重视，因此检测与遗传病及恶 性肿瘤发生有关的突变基因(mutant gene)也成为了分子生物学，医学遗传学以及肿瘤学研究 中的热点。基因突变（(gene mutation)是癌基因激活，抗癌基因失活以及遗传病发生的原因，从广义上讲，基因突变包括点突变，染色体突变和基因组突变等三种形式，后两种基因突变涉及的基因较多，可以通过光学显微镜分析 ...

（转贴自生物谷,http://www.bioon.com/Article_Show.asp?ArticleID=9947）科学家利用磁力来分离微量的DNA，且其准确度及速度都可以媲美PCR。自从1985年PCR诞生以来，就在众多检测DNA含量的方法（放射性标记法、荧光标记法等等）中，一跃而位居龙头的地位。不过PCR这个实验却是相当的复杂而且旷日废时，同时因为用到昂贵的酵素也使得它的价格昂贵了许多。虽然有着种种缺点，但P ...

PCR技术必须有人工合成的合理引物和提取的样品DNA，然后才进行自动热循环，最后进行产物鉴定与分析。引物设计与合成目前只能在少数技术力量较强的研究院、所进行，临床应用只需购买PCR检测试剂盒就可开展工作，PCR自动热循环中影响因素很多，对不同的DNA样品，PCR反应中各种成份加入量和温度循环参数均不一致。现将几种主要影响因素介绍如下。　　一、温度循环参数　　在PCR自动热循环中，最关键的因素是变性与退火的温度。如操作范例 ...

绝版分子生物学实用技术分享:I: 20 种用于各种DNA marker 制备的PLASMID:P1: 2k+1.5k+1k+800+700+600+500+400+300+200X2+100X4 (100BP ladder)P2: 3k+1.5k+1k+900+700+500+300X2 (200BP ladder 奇数)P3: 3k+2k+1.4k+1k+800+600+4X2 (200BP ladder 偶数) (P3\P4\P5 组合, 可拓展为1KB ladder)P4: 4k+2k+1.4k+1k+800+6 ...

MDR1基因C3435T多态性对重症肌无力患者环孢素血药浓度的影响Effect of MDR1 gene C3435T polymorphism on pharmacokinetics of cyclosporine A in摘要：目的 研究MDR1基因C3435T多态性与重症肌无力患者环孢素药物动力学的关系。方法 采用荧光PCR的方法对96名重症肌无力(MG)患者检测MDR1 C3435T基因型，对其中73名临床资料较全者的环孢素用药及血药检测结果与基因 ...

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长非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是一类长度大于200个核苷酸但缺乏蛋白质编码潜力的调控性RNA，其数量多，种类复杂，是近年来非编码RNA研究热点。lncRNA在真核生物基因组中广泛转录，能够与染色质修饰复合物及转录因子等多种蛋白质以及DNA或RNA相互作用，目前有功能注释的lncRNA仅有200多个，但lncRNA行使功能的方式多种多样，在生命过程的转录、调控等阶段发挥了重要的生 ...

我们试验使用的是ISOGEN 于是我就贴上来了 希望有人能看懂吧没办法啊 在日本也只能找到日文的说明ISOGEN法の原理　ISOGEN及びISOGEN-LSは、ヒト、動物、植物及び細菌からのRNA抽出用試薬である。液相分離による方法を用いており、同一試料からDNA、タンパク質も単離することが可能である。一連の操作で、RNA、DNA、タンパク質を単離できるので、貴重な試料に有効であり、また、操作が簡単なので、試料数が多い場合にも ...

【求助】operon公司引物编号为OAM08和OAN05的序列？http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=6115494&sty=1&tpg=25&age=0【求助】请问有关NAATshttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=6118459&sty=1&tpg=25&age=0【求助】real－time PCR试剂盒http://www.dxy.cn/bbs/post ...

PCR产物的电泳检测时间　　一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带　　PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时 ...

怎样选出最合适的Taq酶随着分子生物学研究发展的不断广泛和深入，PCR已成为一门相当成熟的常规技术，而热聚合酶（即Taq酶）的合理选择是PCR成败与否的一个关键因素。目前市面上有多种Taq酶，能够满足多方面的实验需要。那么，如何选择最合适的Taq酶？根据用户经常考虑的指标，如特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度、能否进行复杂模板扩增以及优化条件难易等等，我们在这儿将主要的Taq酶归归类，其性质、用途也就一 ...