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        1 ccgcttagac aatgccccgg agccgccaga ccgtcgcgcc cctgccccat cgtagtatat
        61 gagctcgcct acacaaggac ccccgctaaa agccagagct cccagtcccc gaggcttgaa
        121 gacggggact cccttctcca ccaactctgt cctcgggggg tggggcccca gccgagatca
        181 cagcgcgaca ggagtggggg tggccgctgg agacaggtga agaaacaaga aaactaagaa
        241 atccgagcgg ttggaggggg agtctgtgtg gatgggatgg ggacgccggg ggaggggctg
        301 ggccgctgct cccatgccct gatccgggga gtcccagaga gcctggcgtc gggggaaggt
        361 gcgggggctg gccttcccgc tctggatctg gccaaagctc aaagggagca cggggtgctg
        421 ggaggtaaac tgaggcaacg actggggcta cagctgctag aactgccacc tgaggagtca
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        1141 ggccttgggg tactgctggc caggggtagg atagtatagg aagtagaagg ggaaggaggg
        1201 ttagatagag aatgctgaat aggcagtagt tgggagagag cctcaatatt gggggagggg
        1261 agagtgtagg gaaaaggatc cactgggtga atcctccctc tcagaaccaa taaaatagaa
        1321 ttgacctttt aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa a
        我要扩增的得到基因的CDS(277-1134)全长,然后让其在PCDNA3.1载体上表达。
        上游引物是ACC ATG GGG ACG CCG GGG GAG GG 23bp
        下游引物是 TCA GCT GTG GGG GCG TGT GCT 21 bp
        已经扩了好多次,退火温度试过55,58,60,65,70度TOUCH-DOWN PCR也做过了,都没有大小为八百多的目的基因,但是在100bp的位置有比较亮的条带。
        内对照能扩出来,产量中上。
        哪位能指点一下,我下一步应该怎么做?
        要是需重新设计引物的话,怎么才能优化呢?

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