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分子杂交——Northern基因检测

实验试剂 1. 0.5M EDTA: EDTA 16.61g加ddH2O至80ml 调pH至8.0 定容至100ml。2.50mM NaAc: NaAc 3.4g 加ddH2O至500ml 加DEPC 0.5ml 振荡 37℃过夜,高压灭菌。3. 5×甲醛凝胶电泳缓冲液: MOPS 10.3g加50mM NaAc 400ml 用2N NaOH调pH至7.0 再加入0.5M EDTA 10ml ...

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E. Z. N.A.TM X-press Plasmid Protocol

实验试剂 Materials to Be Provided by User1. Ice 2. Isopropanol (100%) 实验设备 Materials to Be Provided by User1. Tabletop micro-centrifuge capable of 13000 x g2. Nuclease Free 1.5 and 2.0 mL Centrifuge ...

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Constructing a Low-budget Laser Axotomy System to Study Axon Regeneration in C. elegans

实验材料 NameCompanyCatalog NumberCommentsName of the reagentCompanyCatalogue numberComments (optional)535 nm LaserCrylasFDSS532Q3(TEEM Crystal and CRC also offer comparable lasers)All optics and hardwa ...

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0.1-2 Kb RNA Ladder

实验步骤 1.Formaldehyde Denaturing Gels 1)Pre-run a horizontal 1.5-2.5% agarose gel (2-3 mm lane width) containing 6% (w/v) formaldehyde 20 mM MOPS (pH 7.0) 1 mM EDTA submerged in buffer (20 mM MOPS ...

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Immunofluorescence: Rabbit Anti-Murine RELMα

实验步骤 The following protocol used B6 mice that were infected with 200 embryonated Trichuris muris eggs and sacrificed 15 days post-infection. The tip of the cecum was removed rinsed in 1X PBS pH 7.2 a ...

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完全基因剔除转基因动物

实验步骤 1. 基因剔除的技术路线 2. ES细胞 1) ES细胞在合适的体外培养条件下,可使细胞保持分化的全能性。 2) 已建立了非常完善的筛选体系,很容易获得同源重组的细胞群体。3. 构建打靶载体 1) 置换型载体 基本元件包括:与靶位点两侧同源的同源序列臂、正选择标记基因、细菌质粒序列和载体上同源臂外侧的线性化位点。 2) 插入型载体 主要元件包括:打靶位点的同源序 ...

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海洋不同生境总基因组DNA的提取

实验原理 由于环境样品种类繁多、组成复杂、物化性质多变,使得传统的对纯培养微生物提取DNA的方法很难直接应用到环境样品的研究中。近几年来己有多个实验室对从环境样品中提取DNA的方案进行了优化和评价。目前从环境样品中提取DNA的方法大体上分为两类:一类是原位(in situ)裂解法,直接裂解土壤样品中的微生物细胞,抽提DNA,该方法的优点是:操作容易、成本低、DNA的得率高,代表性好。缺点是:提出 ...

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重组毕赤酵母的表达

实验步骤 1. Mut 胞内或分泌表达:为检测表达条件是否有效,可培养GS115β-gal (Mut )(胞内表达-半乳糖苷酶)。亲代载体转化GS115 或KM71 作为胞内表达背景对照。 1) 挑取单克隆,接种至25mlMGY,BMG或BMGY中,(250ml摇瓶),28-30度,250-300rpm摇至OD600=2-6(对数生长,大约16-18小时)。 2) 室温15 ...

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微生物的培养特征观察

实验原理   微生物的培养特征是指微生物培养在培养基上所表现出的群体形态和生长情况。一般可用斜面、液体和半固体培养基来检验不同微生物的培养特征。它们培养在斜面培养基上,可以呈丝线状、刺毛状、串珠状、疏展状、树枝状或假根状。生长在液体培养基内,可以呈混浊、絮状、粘液状、形成菌膜、上层清晰而底部显沉淀状。穿刺培养在半固体培养基中,可以沿接种线向四周蔓延;或仅沿线生长;也可上层生长得好,甚至连成一片, ...

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Using HTR Reagent to Clean Up DNA Samples with PCR Inhibitors

实验步骤 1. Vigorously mix the bottle of the HTR reagent for 30 seconds to ensure the particles are throughly resuspended. Add 100ìl of HRT reagent to 200 μl of sample and mix throughly by vortexing f ...

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Dynabeads® Mouse T-Activator CD3/CD28 – for physiological activation of mouse T cells

实验试剂 Buffer: Phosphate buffered saline with 0.1% bovine serum albumin and 2 mM EDTA pH 7.4 (PBS w/0.1% BSA). Magnet (DynaMag™): See www.invitrogen. com/magnets for magnet recommendations.Culture medi ...

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DNase digestion Protocol

实验步骤 1. Follow the standard protocol until the samples completely pass through the HiBind® RNA Minicolumn (Steps 1-4). Prepare the following: 1) Add 300ul of RNA wash Buffer I to the column and ce ...

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E-Z 96 X-press Plasmid Spin Protocol

实验试剂 Materials to Be Provided by User1. Nuclease Free 1.5 and 2.0 mL Centrifuge Tubes2. Ice 3. Isopropanol (100%) 实验设备 Materials to Be Provided by User1. Tabletop with swinging-bucket rotor capa ...

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质粒DNA的转化

实验原理 转化是将外源DNA分子导入到受体细胞,使之获得新的遗传特性的一种方法。转化所用的受体细胞一般是限制-修饰系统缺陷变异株,即不含限制性内切酶和甲基化酶(R-,M-)。将对数生长期的细菌(受体细胞)经理化方法处理后,细胞膜、的通透性发生暂时性改变,成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞。进入受体细胞的DNA分子通过复制和表达实现信息的转移,使受体细胞具有了新的遗传性状。将经过转化的细胞在 ...

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DNA/RNA/Protein Purification from Cultured Cells Using SQ DNA/RNA/Protein Cell Kit (1-2 x 106 cells)

实验原理 If using the SQ DNA/RNA/Protein for the first time please read this booklet to become familiar with the procedure and its various modifications. Samples are first lysed in a specially formulated ...

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酶联免疫吸附试验C1q测定法

实验试剂 1. 免疫吸附剂系结合有IgG的纤维素。取纤维素(5%,pH值10.5)与溴化氰一起室温反应10min,用0.1mol/L碳酸氢钠缓冲液(pH值8.0)充分洗涤。再与IgG一起于4℃下作用18h(20ml缓冲液中含3g纤维素和100mg IgG)。制备物用27mol/L甘氨酸缓冲液(pH值8.0)配成20%(W/V)悬液,贮于4℃。2. 酶联C1q用戊二醛法将辣根过氧化物酶标记C1q, ...

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High Specificity PCR Amplification Using AccuPrime Taq DNA Polymerase

实验步骤 1. PCR Precautions1) Add the following components to a sterile thin walled 0.25-ml or 0.5-ml PCR tube either at room temperature or on ice: For Small Genomic DNA ( Plasmids or cDN ...

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小鼠心脏组织总RNA的提取纯化

实验步骤 1. 小鼠心脏组织总RNA的提取将冷冻保存的小鼠心脏组织在液氮条件下研磨成粉末,利用Trizol试剂采用一步法提取组织中总RNA。来自同一组别不同动物的总RNA混合提取。 1) 每100 mg研碎的组织加1 ml TRIzol,玻璃匀浆器匀浆至肉眼看不到组织样本颗粒为止。然后移入1.5 ml离心管中,室温放置15 min。 2) 按0.2 ml氯仿/1 ml Trizo ...

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Sequencing Double-Stranded DNA Using the Sequenase Version 2.0 Kit

实验步骤 1.Prepare the DNA for sequencing as per the protocols "Purification and Concentration of Aqueous DNA Solutions" and "Alkali Denaturation of Supercoiled Plasmid DNA".2.Warm a heating block up t ...

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多克隆抗体的免疫电泳技术

实验原理 免疫电泳又称为γ球蛋白电泳或免疫球蛋白电泳技术,这是一种能够判断血液中三种免疫球蛋白IgM,IgG,IgA含量水平的实验方法。在这项实验技术中,首先利用蛋白质的分子量和所带电荷的比值运用水平琼脂糖凝胶电泳技术将蛋白质进行分离,然后将特异性的抗体引入到与电泳方向平行的凹槽中,在抗原和抗体的扩散过程中,抗原和抗体适当比例的结合会导致沉淀的产生。0.85%盐不仅可以终止扩散过程也 ...

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