支原体

支原体问题一、简介：支原体的大小为 0.1～0.3um，可通过滤菌器，常给细胞培养工作带来污染的麻烦。菌落小（直径 0.1-1.0 mm），在固体培养基表面呈特有的"油煎蛋"状。无细胞壁，不能维持固定的形态而呈现多形性，对渗透压敏感，对抑制细胞壁合成的抗生素不敏感。革兰氏染色不易着色，故常用 Giemsa 染色法将其染成淡紫色。细胞膜中胆固醇含量较多，约占 36%，对保持细胞膜的完整性具有一定作用。细胞膜含甾醇，比其他原核生物的膜更坚韧。凡能作用于 ...

PCR法是20世纪80年代中期建立起来的一种体外DNA扩增技术，其基本原理是酶促DNA合成反应，即在DNA模板、引物和脱氧核糖核酸存在下，经DNA聚合酶的作用，使DNA 链扩增延伸。该方法具有灵敏度高、特异性强、快速的特点，但其对实验环境的要求严格，实验成本较高，有时还有假阳性的现象出现。 1、仪器设备 超净工作台、PCR仪、电泳仪、凝胶成像分析系统、台式离心机、旋涡混悬器等。 2、实验试剂 选 ...

溶脲脲原体（Uu）和人型支原体（Mh）是常见的致病性泌尿道支原体。根据支原体不同生化反应特性和对特定物质的不同抵抗力可用于分离鉴定支原体。 【原理】标本分别接种于支原体鉴别培养液内。溶脲脲原体可产生脲酶，使分糖产氨，培养液呈碱性，指示剂由黄色变为粉红色。人型支原体能分解精氨酸产氮，使含有精氨酸肉汤培养液呈碱性而呈粉红色。 【材料】支原体分离鉴定培养液。 【标本采集】标本采集后应立即送检，室温保存 ...

【原理】 肺炎支原体快速检测卡可检测血清中的肺炎支原体lgM抗体。患者的血清样品分别加入两个测试孔内，当样品沿膜扩散时，分别加入3滴抗人lgM碱性磷酸酶复合物、3滴洗液和2滴底物，5分钟后观察结果。质控孔为质量控制，固定有人lgM，测试孔固定有肺炎支原体抗原。阳性反应结果为蓝色，阴性结果为无色。 【材料】 1、患者血清。 2、肺炎支原体lgM检测试剂盒，包括： （1）检测卡：单独锡纸包装，卡上固 ...

支原体（mycoplasma）：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体（支原体是原核细胞，原核细胞的细胞器只有核糖体）。 支原体是在1898年发现的，是一种简单的原核生物。其大小介于细菌和病毒之间。支原体结构也比较简单，多数成球形，没有细胞壁，只有三层结构的细胞膜，故具有较大的可变性。支原体可以在特殊的培养基上接种生长，用此法配合临床进行 ...

200 ml 1000 ml 4000 ml Mycoplasma broth base (Gibco) 4.5 ...

Base: Bacto Heart Infusion Broth 1.2% Bacto Yeast Extract 0.5% Bacto P ...

1.Yeast (93.75 g) + Super Q Water (562.5 ml) per flask. 2.Place in incubator at 37°C for 20 minutes. 3.Heat to 90-100°C for 5 minutes. 4.Cool on ice. 5.Pour into centrifuge bottles and centr ...

1. Spin 1.5ml fresh cells for 3 minutes. 2.Wash the pellet once with TNE buffer. 3. Suspend the pellet well in 20 ul TNE buffer. 4. Add 2 ul proteinase K ( stock 10 ug/ul in water -20 C). 5. Add 20 ul ...

Acid Adjusted Swine Serum 1. The before or morning of: adjust the pH of the swine serum to between 4.3 and 4.5 with 1N HCl. 2. Place serum for at least 1 hour at 4°C (overnight is best). 3. Centri ...

1. Spin 50 ml freshly grown cells. 2.Wash wash pellet twice with PBS. 3. Resuspend the pellet in 1ml TNE buffer ( same buffer as above. use 2 tubes 500 ul each). 4. Add 5 ul proteinase K and incubate ...

计算支原体的菌数不能用血球计数板、比浊法等，需要采用菌落形成单位（CFU）计数法或者颜色改变单位（CCU）测定法。这两种计数法都需要几天才能出结果，也就是原来待测菌液的菌数。请问如何将该菌液保存下来，以便接下来的定量共同培养、抗药等实验？ 如果是直接将菌液放到－20度或者－70度冰箱保存，直到需要的时候再溶解，那么冻存过程中肯定有一定数量的支原体死亡，解冻后的菌液菌数也许远低于测定值CCU/CFU ...

zyh43把支原体菌种接种在培养基中，然后冻存（-20度），在跟踪培养时发现相同的菌种，有的可以保存一年，而有的一个月就死亡，有时加入甘油，只是效果也不大！对此不知各位有什么看法呢？ 1、假如不是同一培养液中的支原体，因为个体差异，保存的时间不一样是很正常的。 2、添加甘油作为保护剂，在-20°C～-30°C的普通冰箱冷冻保存时，因为添加保护剂的细胞混合物的共融点可能处在这个温度 ...

支原体（霉形体）的培养技巧支原体是介于病毒与细菌之间的一类微生物，在自然界广泛存在，使人和多种动物、植物害病。 它缺乏细胞壁而不同于细菌，能在无细胞培养基生长繁殖，并含有RNA和DNA而有别于病毒。支原体以二分裂方式繁殖，基本形态为圆形、丝状形，后者易形成分枝状菌丝，因而得名支原体。其大小介于病毒和细菌之间，最小直径125-250nm，可通过滤器。基因组小只5×108道尔顿，是已知能自 ...

最近看大家常提到支原体污染，就翻了翻书，做了些笔记，现在贴出来和大家分享： 支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0.2um)并独立生活的微生物。约有1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性。可为圆形、丝状或梨形。 支原体形态多变，在光境下不易看清内部结构。电镜下观察支原体膜为三层结构。其中央有电干密度大的密集颗粒群或丝状的中心束。支原体多吸附或散在于细胞表面和细胞之间。横断面与细胞 ...

　　近来在zyh43所在的医院检验科做支原体检测中，遇到一些问题：用支原体（UU/MH）培养、药敏、定量检测试剂盒测得阳性的病人，用这种试剂盒测定的药敏中敏感的抗生素进行临床治疗，但是经过几个疗程的治疗，没有任何效果，支原体感染仍为阳性，因此对他的药敏检测结果产生怀疑，想用一种方法检测这种试剂盒的药敏是否可靠，但是苦于不知用什么方法进行检测最为科学，因此在这里向各位同仁请教一二，望各位大侠不吝指教 ...

　　(一)分离培养方法 　　Uu在含95% 氮气和5%CO2 环境中生长良好。其生长最适pH为5.5-6.5最适温度为36℃-37℃。Uu具有尿素酶，能分解尿素产氨，使含酚红指示剂的Uu液体培养基pH值上升，颜色由黄色变为红色。再将液体培养物转种到Uu固体培养基上，能生长成具特征性油煎蛋样集落。 　　(1 )液体培养基：支原体肉汤培养基80mL，马血清或小牛血清10mL，酵母浸液10mL 10 ...

　　支原体的计数不像一般的细菌采用一般的比浊法，因为支原体在液体培养基中的生长是澄清透明的，所以一般的比浊法无法用于支原体的计数！要采用CCU（即颜色改变单位法）！其原理在于通过支原体在液体培养基中的代谢活力为指标，来检测支原体的相对浓度！ 　　具体做法如下： 　　取12只无菌小试管，每管中加入1。8毫升的支原体液体培养基，然后在第一管中加入0。2毫升的代测支原体菌液，充分混匀后，从第一管中吸取0 ...

　　丁香园网友“园中木”要做支原体CCU，而不知道这个初始菌液的浓度如何选，因缺少标准的0.5麦氏浓度，所以比较困惑，看了相关文献有说将其定量到10的6次方左右，但又是如何定量的呢？ 　　网友“ljksbs”问答：这个我以前做过，只能用倍比稀释法:取12只无菌试管，每管预先加入1.8ml支原体选择性液体培养基，在第一管中加入0.2ml待测菌液，充分混 ...

支原体常用培养基为PPLO很多公司都有出售.但血清（常用马血清或猪血清）和抗生素(醋酸跎)你要自己加.你可以查查.还有改良的Ｆrey's培养基，常用的微生物实验技术书上都可以查到的．可以自己配制的．在液体培养基中通常要加入酚红做指示剂的，当培养基由红色变为黄色时，即可判定支原体的生长程度．要强调一点，支原体的分离可能不太容易，那么要多盲传几代．液体培养基变黄后，在固体培养基上单克隆， ...