肺炎支原体lgM检测

【原理】 肺炎支原体快速检测卡可检测血清中的肺炎支原体lgM抗体。患者的血清样品分别加入两个测试孔内，当样品沿膜扩散时，分别加入3滴抗人lgM碱性磷酸酶复合物、3滴洗液和2滴底物，5分钟后观察结果。质控孔为质量控制，固定有人lgM，测试孔固定有肺炎支原体抗原。阳性反应结果为蓝色，阴性结果为无色。

【材料】

1、患者血清。

2、肺炎支原体lgM检测试剂盒，包括：

（1）检测卡：单独锡纸包装，卡上固定有肺炎支原体抗原或人lgM（质控孔）。

（2）阳性质控液（1.7ml）：含有人抗肺炎支原体lgM的0.1%叠氮钠缓冲液。

（3）阴性质控液（1.7ml）：0.1%叠氮钠缓冲液。

（4）酶结合物：（11ml）：含有以碱性磷酸酶标记的抗人lgM单克隆抗体的0.1%叠氮钠缓冲液。

（5）洗液：9.5%（W/V）的呱基氢氯酸。

（6）底物（15ml）：含有5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸的0.1%叠氮钠的缓冲液。

（7）移液管。

【样本处理】血清样品2—8℃可保存3天，如果不能在此期间测试，-20℃保存，样品不宜反复冻融。

【操作】

1、从冰箱中取出试剂盒，置室温平衡20分钟。

2、从锡纸袋中取出检测卡，作好标记。

3、用移液管滴加2滴血清到卡下端两个测试孔中。

4、22—25℃下孵育2分钟。2分钟内血清应沿膜扩散至上端的测试孔中。

5、加入3滴酶结合物到下端两个测试孔中，22—25℃下孵育2分钟，酶结合物应沿膜扩散至上端的测试孔中。

6、加入3滴洗液到上端两个测试孔中，等待完全吸收。

7、滴加2滴底物试剂到上端两个测试孔，22—25℃下孵育5分钟，5分钟后立即观察反应结果。

【结果】 根据上端两个反应孔的反应结果判断：

阳性结果：上端两孔都出现蓝色。提示肺炎支原体性lgM存在。

阴性结果：质控孔出现蓝色或轻微蓝色，测试孔无色或呈暗灰色，提示不存在肺炎支原体lgM或其浓度在检测下限之下。

无效反应：质控孔不出现蓝色。产生无效反应的可能原因为：试剂或检测卡质量问题，操作不当，样品扩散不好，酶结合物严重污染，血清中含有过多脂质成分等。无污染血清可离心后再次测试 。

【特异性】该试剂盒与下列因素不发生交叉反应：腺病毒、风湿因子、呼吸道合胞病毒、抗核抗体、流感病毒A型和B型、副流感病毒3型、组织胞浆菌、巨细胞病毒等。