抗体抗原实验

PCR扩增模板和抗体可变区基因的扩增 如果构建Fab抗体库必需利用RT-PCR获取抗体基因;构建ScFv抗体库既可以DNA作模板也可以cDNA作模板。本室在构建小鼠ScFv抗体库过程中主要采用DNA作为扩增模板。【材料和试剂】（1）PCR仪（2）Taq酶（3）氯仿（4）琼脂糖【操作步骤】（1）在200μl离心管中混匀下列成分： 模板DNA 5μg 10×P ...

筛选多肽的试剂及配制LB培养基：胰蛋白胨 10g； 酵母提取物：5g； NaCl：5g溶于去离子水，至1L，高压灭菌，室温保存。IPTG/Xgal：称取1.25g IPTG，1.0g Xgal，溶于二甲基甲酰胺，至总体积25ml，-20℃避光保存。LB/IPTG/Xgal平板：1L LB培养基+15g琼脂粉，高压灭菌，冷却至70℃以下，加入1ml IPTG/Xgal，立即铺板，4℃避光保存。 ...

噬菌体展示技术筛选多肽 噬菌体肽库的构建 噬菌体肽库的构建多选用基因合成法，步骤类似于噬菌体抗体库的构建：即化学合成编码各种序列某一长度肽的寡核苷酸片段（如构建的肽文库是由6个氨基酸残基组成，就应含有206种不同的氨基酸序列，即约109种不同密码子的组合），然后通过DNA重组方法，插入到表达载体上的外被蛋白基因（如基因III或基因VIII）中，再利用电穿孔技术，将各种重组体转入大肠杆 ...

阳性克隆的筛选(panning) 一个筛选实验包括数轮识别和复制过程。在每一轮中特异性结合的克隆被选择和扩增。这些克隆在大约3～5轮之后便可居于多数。每轮的富集系数约为102～103因此3轮之后一个特异结合克隆将富集106～109倍。 【材料和试剂】 （1）ELISA板 （2）湿盒 （3）0.1mol/L Na2CO3(pH8.6) （4）3％BSA （5）TBS ...

ELISA检测噬菌体抗体与目的抗原的亲和力 【材料和试剂】 （1）酶标板 （2）酶标仪 （3）0.5mol/L Na2CO3(pH9.6) （4）1％BSA （5）HRP标记的抗M13噬菌体多抗 （6）2mol/L H2SO4 【操作步骤】 (1)将抗原用PBS或0.5mol/L Na2CO3(pH9.6)稀释至10μg/ml; (2)对于要检测的每个 ...

测序模板的快速纯化【材料和试剂】（1）真空泵（2）PEG/NaCl溶液（3）碘化物缓冲液（4）70%乙醇（5）TE缓冲液 10mM Tris-HCl，pH 8.0； 1mM EDTA【操作步骤】（1）扩增噬斑（见上述），在第一次离心后，将500ml含有噬菌体的上清转入新的离心管中。（2）加入200ml PEG/NaCl，颠倒混匀，室温静置10min。（3）离心10min，倾去上 ...

ELISA检测筛选到的靶分子结合肽【材料和试剂】（1）酶标板，酶标仪（2）湿盒（3）吸水纸（4）LB培养基（5）PEG/NaCl（6）TBS（7）0.1M NaHCO3（pH 8.6）（8）HRP底物缓冲液 ABTS贮存液：在100ml 50mM的柠檬酸钠溶液（pH 4.0）中溶解22mgABTS，过滤除菌贮存在4℃。【操作步骤】（1）噬斑扩增上清部分用于DNA序列测定，其余保存于4℃。（ ...

抗体的命名规则 近年来，已召开过多次描述种类的来源、免疫原和抗体类型标准的大会，并加以综合简单的做了一些规定，但需要做一些解释。免疫原通常根据种类的来源确定，前面总是加前缀“抗―”。所以，如果涉及针对脊椎动物刺猬(一种从鼠演化而来的动物)的抗体，就可将试剂写成抗鼠―刺猬的抗体，或者抗鼠―刺猬的免疫球蛋白。产生抗体的种属名总是放在抗体名称的前面，如果是在大角野山羊体内产生的抗体，相应的抗体就 ...

噬斑的扩增【材料和试剂】（1）恒温摇床（2）培养管（3）LB培养基（4）甘油【操作步骤】（1）以LB培养基稀释ER2537过夜培养物。1ml分装至培养管，每管中接种一个克隆。第三轮筛选后，每10个克隆就可能获得一个共同序列。（2）使用消毒牙签或枪头，穿刺噬斑，接种至上述培养管中。注意：要挑选噬斑数不超过100的平板上的噬斑，从而保证每一个噬斑仅包含单个DNA序列。（3）37℃振摇孵育4.5~5 ...

索取（购买）抗体的环节 所有已发表文献中描述的抗体，只需向作者礼貌地提出申请均能获得，只有当多抗已用尽或者供应非常短缺，作者才会婉转地拒绝。所用单抗一般都会毫无保留地提供，而多克隆抗体的产量有限，不足以为申请者提供大量所需试剂。如果抗体生产是为了销售，申请人应该付款。在需要大量抗体时，如制备抗体亲和柱，有时为获得足够的抗体和纯化的抗体，申请人和抗体提供者间应寻求一个可接受的解决办法。 ...

比较基因组学 综合微生物资源(comprehensivemicrobialresource，CMR)储存所有已测序微生物基因组的数据库(Peterson等，2001)。它提供给科研团体关于比较基因组学的基因组中和基因组间相互关系、基因组多样性、进化研究的信息。它显示完整基因组分析结果，例如基因组范围联配点图、圆形示意图、多个物种之间共有基因的表格。这一界面根据基因的性质进行多种数据提取，包 ...

噬菌体肽库的应用一、在生物活性小肽筛选方面的应用 具有生物活性的小肽，如酶抑制剂，受体的激活剂或拮抗剂等，具有重要的基础研究及应用价值。因此，寻找和研究这些小肽一直是生物化学和药物研究中的一个热点。通常，这些小肽可通过合理的体外设计师合成或从化学合成的混合物中分离。但前者需要详细的分子结构信息，而后者又费力、耗时且价格昂贵。而通过噬菌体表达的随机肽库技术则可简便有效的筛选到高活性的小肽，而 ...

基因组结尾 鸟枪法序列数据组装成毗连序列群通常会导致超过99％的基因组被覆盖，并有很多间隙将各个毗连序列群分隔开。间隙通常来自未在基因组文库中出现的区域(如在大肠杆菌中克隆时对宿主有毒性的区域)、质量较差的序列(如来自那些因为具有二级结构而妨碍测序反应的区域)和／或复杂的重复结构。基因组结尾过程的第一步包括利用正向信息和反向信息将毗连序列群连接成大的框架。利用软件例如Bambus(Pop， ...

基因组序列组装完整的和草图式的基因组测序 一旦鸟枪法测序阶段完成，所有的序列必须依据单一序列之间的相似性组装成连续序列。基因组中的重复区对于组装软件是重要的挑战。为协助解决这一问题，TIGR组装器(Sutton等，1995；Pop，Salzberg和Shumway，2002)确定了要进行组装的一组序列中的全部重复区，并且利用从单一克隆插入片段两端获得的正向和反向序列信息。如果重复区较克隆插 ...

全基因组分析 对多种微生物物种的全基因组序列的研究揭示了大量关于微生物物种的生理和进化方面的信息，这为传染性疾病的诊断和治疗提供了新的方法。其中一个主要的发现是：大约每个物种都有半数的开放阅读框的功能是未知的(Fraser等，2000)。通过测定其功能的实验阐明，这些新基因的功能可能会发现新的生化通路、新的毒力决定簇等。从那些用计算机模拟可以确定生物学功能的基因有可能重建一个给定生物赖以生 ...

全基因组序列信息中确定候选疫苗 传统的开发亚单位疫苗的方法包括利用生化的、血清学的、遗传学的方法确定致病原的单个组分。最近开发出了一种高通量的鉴定疫苗的方法即反向疫苗法，它以从全基因组序列信息中鉴定候选疫苗为基础(Rappuoli，2000；Grandi，2001；Rappuoli，200la，b；Masignani，Rappuoli和Pizza，2002；Adu-Bobie等，2003) ...

基于滤膜的DNA阵列 虽然像玻璃这样的固相支持基质对于高通量的处理有许多优点，但是基于滤膜的阵列仍然成为一种流行的样式。之所以这样，一方面是因为采用尼龙滤膜做的基因表达谱实验是以分子生物学家熟悉的标准的Southernblotting方法为基础的。另一方面，大多数研究机构都有利用33P标记的靶cDNA的滤膜杂交实验和获得数据的设备，如感光成像仪。 虽然人们更倾向于使用非放射性标记的 ...

DNA阵列格式 科学领域中，能够彻底改变科研方式的科学突破或新技术不断地涌现。使人类进入基因组学时代的高通量DNA测序技术方面的进展就是这种科学突破的代表。在过去的几年里，人类得到了从人到细菌几十种生命体的基因组序列，而且新的基因组序列正以相当快的速度在累积。在这些研究成果的基础上，许多研究人员把他们的注意力转移到从分子水平上对复杂的生物系统进行研究的工作上来。而这种工作在以前是不可能进行 ...

预合成的DNA阵列 将预合成的DNA探针(通常50～5000bp)固定到如玻璃或者尼龙滤膜等支持物的固相表面上的方法，早在25年前就由EdSouthern设想出来了。由斯坦福大学的PatrickO．Brown实验室所倡导的现代玻璃载片DNA阵列制造技术使得专门进行学术研究的实验室可以用得起DNA阵列。早在1996年，Brown实验室就在因特网上发表了一个建造由自动仪实现的DNA阵列制造方法 ...

各种各样的“组学”的一些定义 今天科学的行话变得越来越难以理解了，在进入蛋白质组的大舞台之前，需要了解一些定义。先从一些与公认的传统有冲突的概念开始，这些概念秘密地潜入了现代科学的前沿阵地。 生物学粗糙的术语，或者太多的“组学”(omks)把人们引向“荒诞”(comics)全能的上帝给了人们现在的“组学”：基因组学――所有能找到的基因转录组学――所有那些行动自由自在的信使们(估计超 ...