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        筛选多肽的试剂及配制

        互联网

        1984
        筛选多肽的试剂及配制
         
        LB培养基:
        胰蛋白胨   10g;
        酵母提取物:5g;
        NaCl:5g
        溶于去离子水,至1L,高压灭菌,室温保存。
        IPTG/Xgal:
        称取1.25g IPTG,1.0g Xgal,溶于二甲基甲酰胺,至总体积25ml,-20℃避光保存。
        LB/IPTG/Xgal平板:
        1L LB培养基+15g琼脂粉,高压灭菌,冷却至70℃以下,加入1ml IPTG/Xgal,立即铺板,4℃避光保存。
        顶层琼脂糖凝胶:
        胰蛋白胨 10g
        酵母提取物5g
        NaCl 5g
        MgCl・6H2O 1g
        琼脂糖7g
        溶于适量去离子水中,至总体积为1L。高压灭菌,分装为50ml/份,室温保存,使用时于微波炉内融化。
        2´M9盐:
        Na2HPO4  12g
        KH2PO4    6g
        NaCl      1g
        NH4Cl     2g
        溶于适量去离子水中,至终体积为1L。
        小型平板:
        500ml 2´M9盐
        500ml 3%琼脂粉
        20ml 20%葡萄糖
        2ml 1M MgSO4
        0.1ml 1M CaCl2
        1ml 硫胺素(10mg/ml)
        在混合之前,将上述成分分别高压灭菌并冷却至70℃以下,葡萄糖和硫胺素采用过滤除菌。平板储存于4℃。
        封闭缓冲液:
        0.1M NaHCO3(pH 8.6)
        5mg/ml BSA
        0.02%NaN3
        过滤除菌,储存于4℃。
        TBS:
        50mM Tris-HCl(pH 7.5)
        150mM NaCl
        高压灭菌,室温储存。
        PEG/NaCl:
        20%(w/v)聚乙醇-8000
        2.5M NaCl
        高压灭菌,室温储存。
        碘化物缓冲液:
        10mM Tris-HCl(pH 8.0)
        1mM EDTA
        4M NaCl
        室温避光保存。
        链亲和素储存液:
        称取1.5mg 冻干链菌素溶于1ml的10mM 磷酸钠(pH 7.2),100mM NaCl,0.02%NaN3溶液。贮存于4℃或-20℃,避免反复冻融。
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