免疫学技术

光学切片 激光共聚焦成像的特性使其不仅能获得胜过普通显微镜的分辨率，同时具有深度识别能力和纵向分辨率，从而可以清晰地观察较厚的标本，并可以掌握其细节。以一个最小步距0.1um的微动步进马达控制载物台升降，使聚焦平面依次位于组织标本的不同层面，可以逐层获得标本相应的光学横断面图像。这一过程称为“光学切片”，这种功能称为“显微CT”。如图所示，用激光扫描共聚焦显微镜对经过荧光染色的神经元从细胞 ...

荧光标记物的定位分析 激光扫描共聚焦显微镜可进行重复性极佳的活细胞或固定细胞的荧光定量分析。利用这一功能可对单个细胞或细胞群的溶酶体、线粒体、DNA、RNA和受体分子含量、成分及分布进行定性和定量测定。 激光扫描共聚焦显微镜可以自动将荧光图像与相差图像重叠，以显示荧光标记物在形态结构上的精确定位。在同一细胞或组织标本上需同时检查两种或两种以上抗原时要进行双(多)重荧光染色。可 ...

三维图像重建 对具有三维空间立体结构的组织细胞进行研究时，尤其是定量研究其结构形态时，往往需要显示空间构造上的三维数据，经计算机图像处理及三维重建软件将得到各光学切片的数据组合，形成一个真实的三维图像，并可从任意角度观察，也可以借助改变照明角度来突出特征性结构，产生更生动逼真的三维效果。一系列模拟荧光处理图像可被储存并以三维动画形式显示，这可谓是形态学研究方法的重大突破。激光共聚焦显微镜三 ...

定量免疫荧光测定 激光扫描共聚焦显微镜可以对经过荧光标记的组织标本共聚焦荧光进行定量分析．并显示荧光沿Z轴的强度变化。它除了可以对单、双或三重标记的细胞及组织标本的荧光进行定量、定位分析外，还可以借助显微CT功能在不损失分辨率的前提下对标本深层进行荧光分布的测量．获得组织形态结构信息。激光扫描共聚焦显微镜同样适用于高灵敏度的快速免疫荧光测定，从而准确检测抗原表达、荧光原位杂交斑点及组织细胞 ...

荧光定量图像分析 激光扫描共聚焦显微镜不仅可以对生物样本进行二维和三维图像分析，还可以与荧光探针相结合，在图像处理的同时，进行图像定量分析。例如细胞面积及周长的测定和细胞核面积的测定，从而可以将生物体的形态学特征进行量化，提高了研究结果的准确性。激光扫描共聚焦显微镜能对单标记或双标记生物样品的共聚焦荧光定量分析，并显示荧光沿Z轴的强度变化。根据实验要求设置好仪器测试的各种参数后，计算机便能 ...

激光扫描共聚焦显维镜定量分析的注意事项《一》制备高特异性和高效价的荧光抗体 标本只有在用荧光探针标记的前提下才能进行共聚焦显微镜检测．制备高特异性和高效价的荧光抗体是检测的关键。这就要求选用高质量的荧光素和高特异性与高效价的免疫血清。同时还要对荧光抗体进行质量鉴定，主要是进行特异性和敏感性鉴定。《二》标本制作要求 1．标本厚度 组织切片或其他标本不能太厚，否则激发光多数消耗在 ...

体视学的基本概念 对各种生物结构的形态学研究是医学各领域研究的重要方面，尤其是定量形态学研究。对器官的整体结构水平形态学研究相对比较容易，比如用排水法测量肝脏的体积则可以清楚地了解正常肝脏与患有肝硬化病人肝脏的体积差别。但是随着科学的发展，研究者越来越关心人体在微观结构上的形态特征。任何组织结构，如细胞、细胞间质、细胞器以及某种染色阳性结构等，均为具有一定形状和空间分布的几何物体。结构的形 ...

激光扫描共聚焦显维镜定量分析的优势 激光扫描共聚焦显微镜与图像半定量分析相比，具有以下优点： 1．更精细、精确度更高。激光扫描共聚焦显微镜对免疫荧光组织化学染色样品做定量分析时，利用激光聚焦和系统软件分析对组织进行深层扫描，不破坏组织细胞结构，可深层次准确定位并精确定量。而一般图像分析只是以荧光灰度的差别变化进行半定量分析。 2．激光扫描共聚焦显微镜一般有两个以上不同波长的 ...

体视学几何探针 在明确二维参数与三维参数之间的关系之后，欲得到三维数据首先要准确有效地获取二维参数。在体视学中这些问题非常容易解决，只要利用适合的几何探针(geometric probes)和恰当的计数方法便可以得到。体视学的测试探针包括零维的测试点(test point)、一维的测试线(testline)、二维的测试框(testframe)、三维的体视框(disector)。几何探针a. ...

ELISPOT（Enzyme-Linked Immunosorbent SPOT 酶联免疫斑点法）：是一种体外检测特异性抗体分泌细胞和细胞因子分泌细胞的固相酶联免疫斑点技术，是ELISA技术和细胞培养技术结合而发展的新型技术。使体外检测各种细胞产生细胞因子及细胞分泌抗体研究有了新的突破ELISPOT技术优点：1. 特异性和敏感性高：能从 20万-30万 细胞中检出 1个 分泌该蛋白的细胞 ...

四乙基罗丹明标记抗体：1.称取1g RB200及2g PCL5放在乳钵中于通风橱中研磨5min；2.加入10ml无水丙酮，3.不4.断搅拌，5.5min后过滤，6.用滤液进行标7.记抗体。剩 余部分吸附在滤纸上，于4℃干燥保存；8.量取一定量的浓度为20mg/ml的抗体，9.按1：1：1的比 ...

PriCells: 正常角膜缘干细胞的免疫染色试剂和材料：1.一抗：（1）ABCG2-----------------小鼠单克隆BXP-21---------1：100（2）连接蛋白-43-----------兔多克隆CX43-------------1：100（3）细胞角蛋白3（K3）-----小鼠单克隆AE5----------- 1：500（4）细胞角蛋白12（K12）---兔多克 ...

ELISA实验质量控制问题说明

Elisa试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。

应用双抗体夹心法测定标本中小鼠α-防御素(α-DF)水平。用纯化的小鼠α-防御素(α-DF)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入α-防御素(α-DF)，再与HRP标记的α-防御素(α-DF)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的α-防御素(α-DF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠α-防御素(α-DF)浓度。

“肝硬化”历来被称作是人类健康的杀手，罹患肝硬化，仿佛在不远处为生命画上了休止符。因为肝硬化的不可逆转与难以治愈，即便最终选择了肝移植，也同样是一条不归之路。而我们今天提到的原发性胆汁性肝硬化（PBC）在肝硬化的队伍里可谓是一把隐形之剑，伤人于无形之中。

环瓜氨酸肽抗体（cyclic citrullinated peptide）简称CCP抗体，其诊断类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis）的敏感性和特异性分别超过80%和96%,是目前类风湿关节炎最突出的免疫学异常指标，也是类风关诊断中最重要的实验室诊断指标之一。

脾细胞1．材料(1) 免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。(2) 1640培养液(3) 2.5％FCS－1640营养液2．操作方法(1) 拉颈或用CO2处死小白鼠。(2) 将小鼠放于70％酒精中浸泡消毒，取出固定于板上，在无菌条件下取脾。(3) 把脾放入5ml含有2.5％FCS的1640液中，冰浴下轻轻洗去脾上的红血球。(4) 用镊子轻轻挤压脾，做成脾细胞悬液，用毛细管将悬液移入小试管中。(5 ...

经过抗体测定的阳性孔，可以扩大培养，进行克隆，以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状不稳定，数量少也易丢失。克隆化的阳性杂交瘤细胞，经过一段时期培养之后，也还会因为细胞突变或特定染色体的丢失，使部分细胞丧失产生抗体的能力，所以需要再次或 ...

目前应用最广的是小白鼠和大白鼠，尤以小白鼠为好。就品系而言以Balb/c小白鼠应用最广，因为所有的小白鼠骨髓瘤系均从Balb/c小白鼠系诱导出来。Balb/c系小白鼠必须用纯系的，雌雄均可，以8~12周龄为宜。大白鼠也可，能产生较多量的单克隆抗体。现在已经在小鼠杂交瘤的基础上，发展了小鼠－大鼠，小鼠－人以及人－人杂交瘤技术。一般而言，抗原的纯度不很重要，特别是免疫原性较强的抗原。免疫程序、剂 ...