PriCells: 正常角膜缘干细胞的免疫染色

试剂和材料：

1. 一抗：

（1） ABCG2-----------------小鼠单克隆BXP-21---------1：100

（2） 连接蛋白-43-----------兔多克隆CX43-------------1：100

（3） 细胞角蛋白3（K3）-----小鼠单克隆AE5----------- 1：500

（4） 细胞角蛋白12（K12）---兔多克隆J7-------------- 1：200

2. 二抗；

（1） 抗小鼠IgG-------------Alexa-488----------------1:2500

（2） 抗兔IgG---------------Alexa-546----------------1:1500

3. 封闭抗体：PBSA配制的10%热灭活羊血清；

4. Trion X-100；

5. PBSA；

6. 多聚甲醛（PFA），将16%原液用PBSA现配成4%的工作浓度；

7. Immu-Mount防褪色封片剂；

8. 载玻片和#1盖玻片；

9. 共聚焦显微镜；

实验方法：

1. 培养在塑料平皿或羊膜上的细胞；

2. CMF-Saline G洗一遍；

3. 用新鲜配制的4% PFA室温固定15min；

4. PBSA洗一遍；

5. 0.1% Triton X-100破膜10min；

6. 样本与一抗室温孵育1h；

7. PBSA洗2遍；

8. 加入二抗室温孵育1h；

9. 用PBSA洗2遍；

10. #1盖玻片，用最小体积的防褪色的封片剂封片；

11. 在荧光或共聚焦显微镜下用40×油镜对样本进行观察；