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        单克隆抗体技术-骨髓瘤细胞

        互联网

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        骨髓瘤细胞能产生并分泌大量的免疫球蛋白,这样的瘤细胞融合后,可能影响或降低所分泌抗体的滴度,所以必须选育出非分泌免疫球蛋白缺陷型的骨髓瘤细胞。

        选择骨髓瘤细胞的条件:

        ①该瘤细胞系的来源应与制备脾细胞小鼠为同一品系,以便两者的组织相容性抗原一致;

        ②骨髓瘤细胞必须是静息状态,不产生γ球蛋白或不分泌到细胞外;

        ③骨髓瘤细胞生长需要一个较高的细胞密度,最好106个细胞/ml;④生长速度快,繁殖时间短。

        目前常用的Balb/c小鼠产生的骨髓瘤细胞株有:

        ①S194/5XXO・BU・1;

        ②SP2/0―Ag14(简称SP2);

        ③P2―X? ­―Ag8・6・5・3(简称653);

        ④FO以653最为常用,它是由矿物油4-甲基-15烷(Pristane,降植烷)诱发出来的一种浆细胞瘤(Minerol Oil plasmacy toma,MOPC)并经过培育形成一株8-氮鸟嘌呤有抵抗力的亚系。

        骨髓瘤细胞一般由有关单位直接引入,保存于-195℃液氮罐中,试验时复苏、增殖、传代即可。由于骨髓瘤细胞是半贴壁状态,很容易脱落,因此不需要胰酶处理。

        为了防止出现返祖现象,在融合前,可将培养基内加入15μg/ml 8-氮鸟嘌呤。取约1×107~6×107对数生长期(即培养15h~20h)的骨髓瘤细胞,在室温离心(400g)10min,沉淀以2.5%FCS―1640液再悬浮并计数。

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