免疫学技术

抗CD3 McAb诱导的细胞毒性T细胞功能的检测【试剂及材料】 （1） 靶细胞：EB病毒转化的B淋巴母细胞。（2） 含5％NCS的RPMI-1640完全培养液（3） 100μCi/ml 51Cr（4） 抗CD3 McAb（4μg/ml）（5） 2％Triton X-100。【操作方法】（1） 靶细胞 ...

抗TCR介导的CTL活性酯酶分析法 细胞毒性T细胞对靶细胞杀伤的主要机制是通过释放的穿孔素-颗粒酶系统介导的溶靶细胞作用或通过fas/fasL系统介导的细胞凋亡作用。因此，对CTL颗粒酶的胞泌作用分析可反映细胞毒性T细胞功能。该方法操作简便且无需靶细胞作为指示细胞。【基本原理】应用直接针对TCR的单克隆抗体，模拟特异性靶细胞的作用，诱导CTL细胞内颗粒丝氨酸酯酶等的释放。抗TCR可与C ...

佛波酯（phorbol esters）和钙离子载体诱导的CTL颗粒酶释放分析法【基本原理】 用佛波酯（phorbol esters）和钙离子载体处理CTL，通过一种TCR复合物非依赖性机制，刺激CTL细胞颗粒酶的胞泌作用。【试剂及材料】（1） 1mg/ml十四酰佛波乙酸酯（phorbol myristate acetate，PMA）二甲亚砜溶液。（2） 1m ...

BA-Spot-ELISA法检测抗体形成细胞【试剂及配制】（1） 包被液（pH 9.6 碳酸盐缓冲液）Na2CO3 0.16gNaHCO3 0.29g蒸馏水加至 100ml（2） 洗涤液（pH 7.4 PBS-Tween 20） KH2PO4 0.2g Na2HPO4・12H20

常用蛋白酶抑制剂抑制剂靶蛋白酶有效浓度储藏溶液注解Antipain木瓜酶和胰酶50μg/ml1mg/ml水溶液对胰凝蛋白酶，胃液素，纤溶酶无影响APMSF胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶10-40μg/ml或10-20μM100mmol/L水溶液毒性比PMSF低，不能抑制胰凝蛋白酶或乙酰胆碱酯酶抑肽酶丝氨酸蛋白酶0.06-2μg/ml10mg/mlPBS溶液避免反复动冻融抑氨肽酶B氨基肽酶40μg/ml溶 ...

反向空斑形成试验（RHPA）【基本原理】 反向空斑形成试验（reversed hemolytic plaque assay，RHPA）是一种体外检测人类Ig分泌细胞的方法。该法将待检人的PBMC或组织来源的淋巴细胞（如扁桃体、脾细胞等）、SPA致敏的羊红细胞（SPA-SRBC）、抗人Ig抗体及补体4种成分混合，注入由两张玻片制成的小室内，密封小室，37℃温育3～5h。此时抗人IgG抗体的F ...

靶细胞诱导的CTL细胞颗粒酶胞泌作用【基本原理】 该法通过抗原（靶细胞）刺激CTL的TCR，从而活化CTL。其特点是，可定量测定CTL-靶细胞特异性的相互作用，这种靶细胞诱导的CTL细胞颗粒酶胞泌作用，也可通过测定效应细胞或靶细胞的表面分子作为辅助指标。【试剂及材料】（1） 特异性靶细胞，其表面携带CTL所识别的抗原；（2） 其余材料见方法1（抗TCR介导 ...

配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶所用溶液溶液成分不同体积(ml)凝胶液中各成分所需体积(ml)123456819浓缩胶水0.681.42.12.73.44.15.56.830%丙烯酰胺溶液0.170.330.50.670.831.01.31.71.0mol/L Tris-HCl，pH 6.80.130.250.380.50.630.751.01.2510%（w/ ...

常用储存液的配制溶液配制方法注释PBS将8.0g NaCl、0.2gKCl、1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4，溶于800ml蒸馏水中，将pH调整至7.4，补充蒸馏水至1L，分装，高压灭菌，室温保存可配成10x储存液TBS将8.0g NaCl、0.2g KCl、3gTris，溶解于800ml蒸馏水中，用1mol/LHCl将pH调整至8.0，补充蒸馏水至1L，分装，高压灭菌，室温 ...

常用发色底物一、产生水溶性产物的发色底物酶底 物简 称启始颜色终颜色吸收峰（nm）辣根过氧化物酶22’-乙基苯噻唑黄酸盐邻苯二胺33¢55¢-四甲基联苯胺ABTSOPDTMB无色无色无色绿色棕色黄色410492450碱性磷酸酶对硝基酚磷酸盐PNPP无色黄色405b-半乳糖苷酶邻硝基苯酚-b-d-吡喃半乳糖苷ONPG无色黄色410二、产生非水溶性产物的发色底物酶底 物简 称启始颜色终 ...

实验用小鼠的品系实验用小鼠的品系品 系缩 写毛 色MHC-II类基因单体型注 释A/JA白色kAKRAK白色kBALB/CC白色d多数患骨髓瘤的亲代为异基因CBACB野鼠色kC3HC3野鼠色kC57BL/6B6黑色b常用做转基因F2的亲代C57BL/10B10黑色b多数H2是同基因DBA/2淡褐色d常用做转基因F2的亲代NZB黑色d适合制作抗自身抗体SJL白色s常用做转基因F2的 ...

配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液溶液成分不同体积(ml)凝胶液中各成分所需体积(ml)5101520253040506%水2.65.37.910.613.215.921.226.530%丙烯酰胺溶液1.02.03.04.05.06.08.010.01.5mol/L Tris-HCl，pH 8.81.32.53.85.06.37.510.012.510%（ ...

Tris缓冲液（TBS和THB）的配制（一）TBS的配制0.05 M TBS ( pH7.4 ) 的配制： Tris ( 三羟甲基胺基甲烷 ) 12.1g NaCl 17.5g 加蒸馏水

细胞爬片、甩片的制备（一）细胞爬片的制备（1）如果使用载玻片或盖玻片，必须在使用之前灭菌。可以一次灭菌并贮存在无菌状态下。如果使用少量的盖玻片，用金属镊子夹住盖玻片，在70%乙醇中浸泡，然后在火焰上烤干。要轻轻地镊取，以防破裂。为了方便起见，可以将盖玻片浸泡于70%的乙醇中，使用时放在火焰上处理。如果使用的盖玻片或载玻片数量较多，可以将它们放于专用的金属支架上，然后高压消毒。如果需要的数量更大， ...

125I-UdR释放试验测定NK细胞活性【基本原理】 125I-UdR（125I-2′脱氧尿嘧啶核苷）是胸腺嘧啶核苷的类似物，作为DNA合成的前体物，能相当特异地取代胸腺嘧啶核苷掺入到细胞核DNA链上。因此，可用125I-UdR标记体外传代培养的肿瘤细胞作为靶细胞，以外周血分离的单个核细胞或小鼠脾细胞作为效应细胞，进行体外NK细胞活性检测。被效应细胞杀伤的�靶细胞溶解后可释放125I-Ud ...

LAK细胞和TIL活性的测定 LAK细胞和TIL活性的测定基本同NK活性测定方法。但所用靶细胞为对NK不敏感的肿瘤细胞，如Raji、Daudi或自体肿瘤细胞。常采用同位素法如51Cr释放试验、发光免疫测定法及MTT比色法等。 在此介绍MTT比色法。【试剂及材料】（1） 试剂：①四甲基偶氮盐（MTT）；②酸化异丙醇:含0.04mol/L HCl的异丙醇；③96孔细胞培养板。 ...

凝胶染色（一）标准考马斯亮蓝染色法（1）电泳后，将凝胶转入一洁净的玻璃或塑料容器中。加入５倍于凝胶体积的0.25%考马斯亮蓝R-250(溶解于50%甲醇和10%乙酸中)；（2）室温下振摇温育４ｈ至过夜；（3）去除染色液，收集保存可重复使用20-40次；（4）依次在25%甲醇和7.5%乙酸中室温振摇下脱色。灵敏度为0.1-0.5ug蛋白／每条带。注：使用加热的染色液或脱色液可以缩短染色或脱色时间。 ...

乳酸脱氢酶释放试验测定NK细胞活性【基本原理】 乳酸脱氢酶（LDH）是活细胞胞浆内含酶之一，在正常情况下，不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时，细胞膜通透性改变，LDH可释放至介质中.释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中，使氧化型辅酶I（NAD+）变成还原型辅酶I（NADH2），后者再通过递氢体-吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）还原碘硝基氯化氮唑蓝（INT）或硝基氯化四氮唑 ...

中性粒细胞吞噬功能的测定中性粒细胞（polymorphonuclear leukocyte，PMN）的功能包括粘附、移动、吞噬杀菌等，是机体天然免疫力的重要组成部分。【试剂及材料】（1） 白色葡萄球菌（2） 肉汤培养基（3） 硷性美蓝液【操作方法】 （1） 菌液的制备 将白色葡萄球菌接种于中，放37℃温箱内培养12h左右；置 ...

中性粒细胞粘附功能的测定【试剂及材料】（1） 尼龙纤维：粗3但尼尔，长4cm，200型。（2） 肝素抗凝血1ml（3） 硷性美蓝液【操作方法】（1） 取尼龙纤维70mg，塞入尖端直径为1mm左右的毛细吸管内15mm；（2） 将毛细吸管竖立于试管内，注入肝素抗凝血1ml，使之通过尼龙纤维；（3） 涂片并固定染色后（同 ...