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        中性粒细胞移动功能的测定―琼脂糖平板法

        互联网

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        试剂及材料

        1. 琼脂糖和明胶

        2. 趋化因子(制备见附注)

        3. Giemsa染液

        4. 显微测微器

        操作方法

        1. 称0.25g琼脂糖,加12.5ml蒸馏水,沸水内加热溶化,冷至47℃;

        2. 另取Hanks液2ml,10%明胶25ml和蒸馏水8ml,混匀后加7%的NaHCO3 2滴;

        3. 将二者混匀倒板。在琼脂板上打孔,孔径3mm,孔间距2~3mm;

        4. 中央孔内加中性粒细胞悬液10μl,左侧孔内加10μl趋化因子,右侧孔内加10μl对照液;

        5. 将琼脂糖板放入湿盒内,于37℃,5%CO2 条件下温育4~8h;

        6. 待孔中液体干后用甲醇固定30min,琼脂糖膜用Giemsa染色。

        结果分析

        用显微测微器测量细胞从中央孔向左侧孔的移动距离A,以及向右侧孔的移动距离B,趋化指数为A/B。

        附注:趋化因子的制备

        1. 取酵母多糖500mg,加入50ml Hanks液中,煮沸1h;2000r/min离心20min, 弃上清。用Hanks液调整酵母多糖为50mg/ml,4℃保存;

        2. 用前取1份酵母多糖和3份新鲜血清混合,37℃搅拌反应30min,离心弃上清;

        3. 并用含0.1%明胶的Hanks液等体积稀释,即为趋化因子。也可用合成多肽(f-met-leu-phe,10~8mol/L,Sigma)作为趋化因子。

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