免疫学技术

材料二甲苯　　酒精（100％，95％）　　EDTA抗原修复工作液（pH8.0，稀释50倍使用）　　0.5M Tris-NaCl (TBS) pH7.4（稀释10倍使用）　　DAB显色液（临用前配制：试剂盒A、B、C各50ul，于1ml水中混匀）。方法1. 石蜡切片置60℃烘箱中烘烤过夜　　2. 二甲苯中脱蜡，梯度酒精入水(无水乙醇，95％酒精)，浸泡于蒸馏水中待用　　3. 抗原修复取500m ...

相关专题 一、概述 可溶性抗原（如细菌浸出液、含菌病料浸出液、血清以及其他来源的蛋白质、多糖质、类脂体等）与其相应的抗体相遇后，在电解质参与下，抗原抗体结合形成白色絮状沉淀，出现白色沉淀线，此种现象称为沉淀反应。沉淀反应中的抗原叫沉淀原（precipitinogen）与沉淀原发生反应的抗体称为沉淀素（precipitin）。沉淀反应的发生机制 ...

相关专题 免疫沉淀是利用特异性抗体识别并分离抗原的方法。 材料： 上样buffer的配方(用前现配): 2ul 1.25M Tris-HCL pH 6.8 35ul distilled water 2.5ul 2-mercaptoethanol 12.5ul 10%SDS 10ul ...

相关专题 酶与抗体交联的方法有许多种根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物，可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。 　　戊二醛二步法　　1.　原理：戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。　　2.　标记步骤：　　(1)　称取HRP25mg溶于 ...

相关专题 (一)　原理 　　目前用于抗体标记的荧光素主要有异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocynateFITC)或罗达明(Lissamine rhodamine B200 RB200)。在硷性条件下FITC的碳酰胺键可与抗体赖氨酸的ε氨基共价结合，标记后的抗体仍保持与相应抗原结合的能力。在荧光灯源紫外线或 ...

相关专题 一、固定剂 　　大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选 ...

相关专题 腹水：腹水重组后可加入少量叠氮纳等来阻止细菌生长。腹水应当冻存。单抗最好能够小包装保存以避免反复冻融。若要保存较长时间，则不要在4℃。和血清不同，腹水中含有蛋白酶，会使抗体效价下降，因此加入蛋白酶抑制剂可以选择。 纯IgG:不要稀释抗体后来保存，除非加入羊血清，BSA等后。IgG会和玻璃，塑料等粘附。当IgG的浓度小于0.1 mg/ ...

相关专题 （一）材料与试剂1．抗原 牛结核PPD。2．血清 待检血清、标准结核阳性血清和结核阴性血清。3．硝酸纤维膜 孔径0.45µm。4．氯化金（优质）5．0.2Mol/L PB液6．0.05Mol/L Tris—HCl缓冲液7．硝酸银显影液（现用现配） 明胶（20g/L） 6.00ml 对苯 ...

相关专题 一、单克隆抗体的概念和原理　　免疫反应是人类对疾病具有抵抗力的重要因素。当动物体受抗原刺激后可产生抗体。抗体的特异性取决于抗原分子的决定簇，各种抗原分子具有很多抗原决定簇，因此，免疫动物所产生的抗体实为多种抗体的混合物。用这种传统方法制备抗体效率低、产量有限，且动物抗体注入人体可产生严重的过敏反应。此外，要把这些不同的抗体分开也极困 ...

相关专题 　　血管内皮细胞不仅参与调节血管通透性和凝血过程，在免疫调节，移植排斥，肿瘤转移，炎症等许多过程中也具有重要作用。内皮细胞培养是体外研究内皮细胞功能的重要手段。70年代Eric等建立了内皮细胞分离及体外培养的方法。人脐带静脉是人血管内皮细胞最易获取的来源，在人内皮细胞的研究中被普遍采用。 　　㈠ 原理在体外，内皮细胞在内皮细胞生长因 ...

相关专题 　　免疫斑点试验(Dot Immunobinding Assay DIBA)是利用硝酸纤维素膜(N、C或醋酸纤维素膜作为固相支持物，进行抗原抗体反应的免疫学检测方法。该法具有微量、快速、经济、方便等特点，可用于检测抗体或抗原。近年来已较多地应用于医学基础研究和疾病的诊断。 　　(一)　免疫斑点试验的基本原理 　　硝酸纤维素膜和醋酸纤 ...

相关专题 　　淋巴细胞增殖和分化是机体免疫应答过程的一个重要阶段。因此，检测淋巴细胞增殖水平是细胞免疫研究和临床免疫功能检测的一种常用方法。 　　(一)　原理 　　T细胞、B细胞表面具有识别抗原的受体和有丝分裂原受体，在特异性抗原刺激下可使相应淋巴细胞克隆发生增殖。植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(ConA)抗CD２、抗CD３ McAb作为多 ...

相关专题 　　(一)　原理　　Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低( 粘度也很小，可形成高达1.3g／ml密度，采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200～1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。由于Percoll扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。此外，Percoll不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广泛用 ...

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相关专题 　　70年代后期在免疫酶技术中利用生物素-亲和素系统(Biotin-Avidin System BAS)标记抗体发展了又一种新型生物反应放大技术。由于BAS亲和力高所以具有高灵敏度、高特异性和稳定性等优点，在现代生物免疫学领域中已得到广泛应用，并显示出明显的优越性。已报道有用于放射免疫、免疫荧光和免疫电镜等技术中，但应用更多的还是在 ...

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相关专题 　　1975年Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞与和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交瘤细胞既可产生抗体，又可无性繁殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破使血清学的研究进入了一个高度精确的新纪元。　　免疫细胞化学的 技术关键之一是制备特异性强、亲合力大、滴度高的特异性抗体，由于每种抗原都有几 ...