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        干扰素(IFN)生物学活性检测

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          干扰素(IFN)根据其产生细胞不同和理化性质、犐z物学特性的差异可分为α干扰素(IFN-α)、β干扰素(IFN-β)和γ-干扰素(IFN-γ)。它们在机体免疫 调节、抗病毒感染中具有重要作用。检测IFN的方法主要分为定量测定(常用ELISA)和生物学活性的检测,后者较为常用。
          (一)原理
          干扰素能刺激某些指示细胞(如人羊膜上皮细胞Wish株、人喉癌细胞株Hep-2以及人胚肌皮或肺单层细胞)产生抗病毒蛋白,从而使细胞免受水疱性口炎病毒(VSV)的攻击,根据待测样品不同稀释度的保护能力,计算出干扰素生物学活性单位。
          (二) 操作步骤
                96孔培养板中加入不同稀释度的IFN和标准IFN,
                每个稀释度设3孔,每孔50μl,病毒对照不加IFN
                          ↓
                  每孔加入100μl 1.5~2×105/ ml Wish
                  或Hep-2细胞悬液,37℃、CO孵箱培养6~12h,
                  使细胞贴壁为单层
                          ↓
                  每孔加入50μl含100个 TCID50 VSV,
                 细胞对照不加病毒液
                          ↓
                  根据细胞病变状态,终止培养前3~4h
                  加入5mg/ml mtt , 15μL/孔
                          ↓
                  加入适量生理盐水,用滴管轻轻吹吸
                  弃去悬浮病变细胞和死细胞
                          ↓
                  200μl/孔 二甲亚砜(DMSO ),作用10min
                          ↓
                  测OD(570nm),表示活细胞中含甲 的量,
                  也可用刚果红摄入法、结晶紫染色法
                     测定IFN对活细胞的保护水平
          计算:
          以保护半数(50%)细胞免受病毒损害的最高干扰素稀释度为1个干扰素活性单位。也可从标准曲线中求得待测样品的IFN活性单位。
          (三) 试剂和器材
          1. VSV
          2. WISH、HeP-2细胞株或人胚肌皮或肺单层培养物。
          3. MTT
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