细胞技术

PriCells: AUTOMACS系统自动分选体系分选小鼠CD4+ CD25+抑制性细胞由此方法得到的阴性细胞（CD4+ CD25-）可用作反应细胞或对照细胞实验材料：1. 小鼠2. HBSS洗涤缓冲液3. MACS缓冲液4. CD8a（Ly-2）磁珠5. 结合缓冲液6. biotin-抗CD25（7D4）7. Streptavidin-PE8. ...

小鼠单个核细胞分离一步梯度法去除死细胞基本原理活细胞（密度较小）和死细胞（密度较大）密度不同，从而有助于将活的淋巴细胞和红细胞分离。附加材料高密度溶液：Ficoll-Paque（Ficoll和泛影酸钠；Pharmacia LKB）或Lympholyte-M（Cedarlane）12ml或50ml聚丙烯离心管（比聚苯乙烯离心管好）注：Ficoll-Paque和Lympholy ...

PriCells: 磁珠分选柱手工操作分离小鼠CD4+ CD25+抑制性细胞实验材料：1. 小鼠2. HBSS洗涤缓冲液3. MACS缓冲液4. CD8a（Ly-2）磁珠5. 结合缓冲液6. biotin-抗CD25（7D4）7. Streptavidin-PE8. 抗PE磁珠9. 完全RPMI培养基10. 小鼠CD3+T细胞富集柱和1 ...

PriCells: 磁珠法分离小鼠T细胞和B细胞基本方案用AUTOMACS系统进行总T细胞、CD4+细胞或CD8+T细胞的自动分离实验材料1、小鼠2、HBSS洗涤缓冲液3、MACS缓冲液4、磁珠5、RPMI-10完全培养基6、AUTOMACS系统和分选柱7、30μm尼龙网或40μm预分离滤膜实验方法1、用5只小鼠的淋巴结或2只小鼠的脾脏制备单细胞悬液并去除红细胞。2、细胞在10mlHBSS ...

实验材料：1. 胶原酶消化的脾脏细胞悬液2. 高密度牛血清白蛋白（BSA）溶液3. RPMI 1640培养基（如Life Technologies），4℃和37℃4. RPMI-5完全培养基，4℃和37℃5. 抗体偶联的绵羊红细胞（EA）6. 用于流式细胞分析的一抗7. 用于流式细胞分析的二抗（荧光结合的小鼠抗大鼠IgG和IgM；如Boehringer M ...

从小鼠脾脏分离小鼠天然杀伤细胞基本方案：由于所用Mab只能检测C57BL背景小鼠体内的NK1.1CD3-NK细胞，故本方案适用于C57BL/6或者C57BL/10（以及H2b、d、q同系小鼠）小鼠脾脏细胞。清楚杂细胞所用的单克隆抗体的活性对本方案至关重要。单克隆抗体可以买到，并且其杂交瘤可以从ATCC得到，因此建议检测单克隆抗体的活性以保证实验成功。最佳补体和细胞浓度也需要通过 ...

辅助方案：胶原酶消化制备脾脏细胞悬液实验材料：1. 4000U/ml胶原酶D，融化后置于冰上2. HBSS，已灭菌，含Ca+、Mg2+（购置于Life Technologies）3. 小鼠脾脏4. 皮下注射针，22G×11/2in内径（Becton Dickinson）5. 10ml、5ml一次性注射器（如Becton Dickinson）6. 100mm直径 ...

牛或猪大血管原代内皮细胞的分离-灌注酶消化法实验材料：1. 牛或猪2. PBS，含青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml3. 0.1%Ⅰ型胶原酶4. 眼科剪，眼科镊5. 慕丝线6. 离心管（15ml、50ml）实验方法：1. 分离牛或猪的主动脉等大血管，长15-20cm，用丝线结扎血管各分支后，取出主动脉。放入含青霉素100U/ ...

PriCells: 树突细胞的分离-用小鼠骨髓前体细胞培养树突细胞实验材料：1. 6-7周龄小鼠（最好为雄性鼠，因为它们的骨头比较粗大；运输后需要休息至少5天；不要使用应激或脱水的老鼠）2. 70%乙醇3. 冰冷的以及室温的RPMI-1640培养基（如Life Technologies）4. 氯化铵溶液0.02mol/L Tris·Cl，pH7.2 /0.14mol/L N ...

PriCells: 人或动物肺毛细血管原代内皮细胞的分离实验材料：1. 人或动物的肺部毛细血管2. PBS，含青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml3. 3mg/ml中性蛋白酶、0.25%胰蛋白酶4. 眼科剪，眼科镊5. 20μm尼龙筛、100μm尼龙筛6. 离心管（15ml、50ml）实验方法：1. 将动物麻醉后开胸取肺组织，将肺 ...

人或动物脑毛细血管原代内皮细胞的分离实验材料：1. 人或动物的脑部毛细血管2. PBS，含青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml3. 10μg/ml DNaseⅠ和1mg/ml胶原酶4. 250g/L BSA5. 眼科剪，眼科镊6. 60μm尼龙筛、150μm尼龙筛和230μm尼龙筛7. 离心管（15ml、50ml ...

PriCells: 牛或猪大血管原代内皮细胞的分离-消化刮脱法实验材料：1. 牛或猪2. PBS，含青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml3. 0.1%Ⅰ型胶原酶4. 眼科剪，眼科镊5. 慕丝线6. 离心管（15ml、50ml）实验方法：1. 分离牛或猪的主动脉等大血管，长15-20cm，用丝线结扎血管各分支后，取出主动脉。放入盛有含青霉素100U/ ...

动物气管和支气管假复层纤毛柱状上皮细胞的培养实验材料：1.大鼠或兔的气管和支气管2.0.1%中性蛋白酶或0.125%胰蛋白酶和0.01%EDTA混合消化液3.不含Ca2+和Mg2+的1×PBS（pH7.4），含青霉素100u/ml和链霉素100μg/ml，pH7.44.解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊5.一次性注射器（1ml或5ml）6.200目不锈钢网筛7.离心 ...

PriCells:动物淋巴管内皮细胞的分离基本方案1：灌注消化法实验材料：1.哺乳动物胸导管淋巴管2.1×PBS，含青霉素100u/ml和链霉素100μg/ml，pH7.43.0.2%Ⅰ型胶原酶4.眼科剪，眼科镊5.慕丝线（7号线）、细铁丝6.离心管（15ml、50ml）实验方法：1.处死动物后，打开胸腔，分离胸导管，在胸导管上端结扎，切取10-15cm的一段。将胸导管放入预冷PB ...

PriCells:动物小血管内皮细胞的分离实验材料：1.兔、狗或大鼠等动物2.1×PBS，含青霉素100u/ml和链霉素100μg/ml，pH7.43.0.2%Ⅰ型胶原酶4.眼科剪，眼科镊5.慕丝线（7号线）、细铁丝6.离心管（15ml、50ml）实验方法：1.处死动物后，局部消毒取出主动脉，用加入抗菌素的PBS冲洗，放入盛有PBS的平皿中，摘除血管外的脂肪和结缔组织。2.用细丝 ...

动物淋巴管内皮细胞的分离基本方案2：植块培养法实验材料：1.哺乳动物胸导管或肠系膜淋巴管2.1%明胶铺底，置超净台晾干3.1×PBS，含青霉素100u/ml和链霉素100μg/ml，pH7.44.眼科剪，眼科镊5.慕丝线（7号线）、细铁丝6.离心管（15ml、50ml）实验方法：1.处死动物后，打开胸腔，分离胸导管，在胸导管上端结扎，切取10-15cm的一段。将胸 ...

PriCells:人真皮复合培养法实验材料：1.早产儿或死亡胎儿的皮肤，也可用手术取下的成体皮肤2.1000000U/L中性蛋白酶，0.25%胰蛋白酶3.MEM和HBSS混合液，添加20mmol/LHEPES、200000IU/L青霉素和200mg/L链霉素和1.59g/L庆大霉素，HBSS4.手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊5.不锈钢网6.离心管（15ml、50ml）实验方 ...

PriCells:人角质形成细胞的分离培养实验材料：1.早产儿或死亡胎儿的皮肤，也可用手术取下的成体皮肤2.1000000U/L中性蛋白酶，0.25%胰蛋白酶3.MEM和HBSS混合液，添加20mmol/LHEPES、200000IU/L青霉素和200mg/L链霉素和1.5g/L庆大霉素4.手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊5.离心管（15ml、50ml）实验方法：1.取厚1 ...

PriCells:小鼠乳腺上皮细胞培养实验材料：1.10-12周龄妊娠小鼠乳腺组织2.不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素和200000U/L庆大霉素，pH7.43.FBS、含5%牛血清白蛋白（BSA）的PBS液或DMEM4.0.05%Ⅰ型胶原酶50ml、0.05%蛋白酶50ml、0.1%DNaseⅠ型、结晶紫（0.1%）/枸橼酸（0. ...

PriCells:正常人表皮朗格汉斯细胞的培养实验材料：1.多来自外科手术的临床病人或死亡时间不超过24h尸体的胸、腹部皮肤；2.不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2；3.培养用液：①RPMI1640完全培养液，由RPMI1640培养基添加10%人AB血清、2mol/L谷氨酰胺、50μg/ml庆大霉素和1μg/ml消炎痛；②D ...