PriCells: 动物小血管内皮细胞的分离

实验材料：

1. 兔、狗或大鼠等动物

2. 1×PBS，含青霉素100u/ml和链霉素100μg/ml，pH7.4

3. 0.2%Ⅰ型胶原酶

4. 眼科剪，眼科镊

5. 慕丝线（7号线）、细铁丝

6. 离心管（15ml、50ml）

实验方法：

1. 处死动物后，局部消毒取出主动脉，用加入抗菌素的PBS冲洗，放入盛有PBS的平皿中，摘除血管外的脂肪和结缔组织。

2. 用细丝线结扎血管的一端，用镊子轻轻夹住结扎侧的末端，用一铁丝将扎住的末端捅进血管内，将血管翻转过来，使内皮细胞面向外。血管另一侧的末端也塞进血管内，用细丝线结扎住，使整个血管仅内皮细胞暴露在外面。

3. 把血管放至盛有5mol 0.2%胶原酶的平皿中，置于37℃ CO₂  孵箱中消化10-15min，多次摇动平皿，以便内皮细胞脱落。消化近结束时，在倒置显微镜下观察，若大部分内皮细胞已脱落，加少量培养液终止消化。

4. 将消化液收集到离心管中，1000r/min离心5min。加入培养基重悬制成细胞悬液，放入T25的细胞培养瓶中，置于37℃，含5%CO₂ 的孵箱中培养。2天换液1次。