细胞技术

1. 2 稳定转染细胞株的构建原理：稳定转染，就是转染的质粒DNA整合到宿主细胞染色体上，使宿主细胞可长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时转染基础上对靶细胞进行筛选或者应用高转染效率的病毒，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物进行细胞传代，从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。应用： 观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能（稳定，可长期进行研究）一般流程：1） 筛选浓度测定： ...

Comparison of lysis methods Sonication most efficient method of cell fractionation problem: heat build up which can denature proteins (proportionate to length of sonication) precaution: do on ice and ...

Cell cycle analysis of Escherichia coli cells C period = the time for a round of chromosome replication D period = the time between the end of a round of chromosome replication and cell division Deter ...

MaterialsPlate of cells to be made competent TSS buffer LB media Ice Glassware & EquipmentFalcon tubes 500μl Eppendorf tubes on ice 200ml conical flask 200μl pipetman or repeating pipettor 5ml pipette ...

Electrocompetent CellsFrom Danijela Dukovski at Harvard Medical School. This protocol works well. --Julie Norville MaterialsDI water10% GlycerolSpecial EquipmentCentrifugeIce water bathLiquid nitrogen ...

INTRODUCTION Flow cytometry is frequently used to assess nucleic acid content in individual cells. Based on DNA content alone however cells in the quiescent G0 phase cannot be discriminated from cells ...

Protocols for Neural Cell Culture 2001 Humana.pdf美国进口bioworld抗体几大优势：1.2800多种美国进口一抗二抗，重组蛋白，在中国设立现货仓库，在3天内迅速到货。我们与顺丰快递合作的，运输没有问题2.质量保证，参考文献已突破400篇 ，很多权威客户在使用这个品牌抗体，如药物所，诺华，罗氏，中科院，复旦，交大，北大，清华，浙大等，完善的技 ...

A fluorescence-based in vitro assay for investigating early endosome dynamicsSina V Barysch12 Reinhard Jahn1 & Silvio O Rizzoli2ABSTRACTEarly endosomes receive material from the plasma membrane by fus ...

前言G-偶联蛋白受体（GPCRs），即 7-跨膜蛋白，是当今临床与科研药物的单一治疗靶点，也是迄今发现最大的靶点家族。据推测人基因组中，该家族的功能成员超过300个，涉及多种不同细胞与组织间的广泛信号途径。研究证实，对GPCR功能的调节，有助于免疫学、神经病学、心脏病学与肿瘤学领域多种疾病的治疗。通过应用新的基于细胞水平的受体功能检测技术，候选药物对新调节子的确认率显著提高，损耗率（定义为临床前检 ...

磷酸钙转染法材料：质粒DNA指数生长的真核细胞2 M CaCl22×HBS （pH 7.05）配方:2×HBS （pH7.05）：900 ml 超纯水中加入NaCl 16.3 g KCl 0.74 g Na2HPO4 0.214g，Glucose 2.4 g 和HEPES 10 g，调pH 至7.05，定容至1 升，过滤（0.2 μm 滤膜）后储存于4℃备用。方法：1. 细胞分盘： 通过胰酶消化收 ...

流式细胞仪技术，主要是测量群体中单个细胞经适当染色后其成分所发出的散射光和荧光，经染色的细胞在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞经过焦点时，发出一束散射光/或荧光。它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器(光电倍增管或一个固态装置)，光检测器把散射光定量转化成电信号，经数字转换器进行数字化后而成整数，然后进行电子存储，以后数据可以调出显示和进行分析。其优点如下：1、具有操作简便，只要 ...

一、surface marker染色1、收获细胞，0.5-1x10e6/tube，用FACS Buffer 2ml洗涤一次，倾倒后滤纸吸干管口液体。2、加入预先配置好的你需要染的surface marker的抗体混合液（即CD3，CD4，CD8抗体mixture），充分混匀，室温下孵育20分钟。3、FACS Buffer 2 ml洗涤一次倾倒后滤纸吸干管口液体。二、Intracellular St ...

目的：流式细胞仪开机程序、预设获取模式文件、设定和调整、样品分析、关机程序一．开机程序1．检查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。2．打开储液箱，倒掉废液并在废液桶中加入400ml漂白水原液。打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFlow），合上压力阀。确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。3．将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮 ...

流式细胞术(Flow cytometry，简称FCM)是20世纪70年代发展起来的一种对细胞的物理性质及化学性质，如细胞大小、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等进行快速测定并可分类收集的技术。该技术超越了传统显微分析技术，能在瞬间对大量细胞进行准确的分析。这种快速有效的细胞分析技术已广泛应用于细胞生物学、免疫学、发育生物学、细胞动力学、生理学、分子生物学等生物学研究的各个领域【--，在其基础 ...

摘要：随着科技水平的不断深入，科研设备的不断更新，国家对科研投入的不断增多，植物检测技术也得到了进一步的发展。流式细胞仪植物检测技术是近几年在我国刚刚兴起的一项新技术，对许多植物科技工作者来说还比较陌生。本文用比较通俗的语言介绍了进行流式细胞仪分析所必须的基本概念、发展历史、工作原理、知名品牌、常见型号及其在植物上的应用。关键词：流式细胞仪；植物；检测技术Flow CytometryZhao Ho ...

一、流式细胞术常规检测时的样品制备 (一)直接免疫荧光标记法 取一定量细胞(约1X106细胞／ml)，在每一管中分别加入50μl的HAB，并充分混匀，于室温中静置1分钟以上()再直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应(如做双标或多标染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入)，。孵育20-60分钟后，用PBS(pH7．2―7．4)洗1-2次，加入缓冲液重悬，上机检测。本方法操作简便，结果 ...

一.睡眠性阵发性血红蛋白尿PNH睡眠性阵发性血红蛋白尿（PNH）是一种获得性造血干细胞异常，临床主要表现为骨髓丧失造血功能、血栓、慢性溶血性贫血急性发作。PNH的发病率很低，发病原因不详，可能与再生障碍性贫血有关系。PNH的临床表现不一，疾病进程多变，给临床的诊断治疗和疾病研究带来很多困难。最近15年，在PNH的细胞和分子生物学研究中取得了重要进展，定义了导致PNH异常表现的分子缺陷。而使用流式细 ...

外周血现已被广泛地被用作骨髓移植、癌症患者接受大剂量化疗或放疗后骨髓重建造所需血干细胞（Hemotopoietic Progenitor Cells HPC）的来源。外周血源性干细胞现主要被运用自体移植，其应用面也逐步拓展至异基因骨髓移植中。使用外周血替代骨髓作为造血干细胞的来源有着以下优点：1，易采集；2，对供者无需全身麻醉；3，减少了采集后并发症的发生；4，受者造血系统重建快；5，费用低；6， ...

一.细胞培养的基本原理　　细胞培养是用酶消化法将组织碎块分离成单个细胞，用培养基制成细胞悬液，在体外适宜条件下，使细胞生长繁殖，并保留其一定的结构和功能特性。细胞培养与组织培养、器官培养主要不同点在于原始培养的对象不同。细胞培养使用的是单个细胞悬液，组织培养使用的是组织块(0．5～1立方毫米)或薄片(厚0．2毫米)，而器官培养使用的是器官原基或器官的一部分或整个器官。在组织培养中，细胞自组织块周围 ...

Abstract Tumor genotyping can provide a useful guide to drive clinical trials inform treatment options and predict patient outcomes1. This is due in large part to our understanding of major cancer pat ...