细胞技术

1． 临床意义心肌梗塞、脑血管血栓形成、深静脉血栓形成、脑栓塞和肺栓塞等血栓性疾病在中国有很高的发病率，也是致死的重要原因。血小板活化是血栓形成的重要环节，检测血小板的活化状态可辅助诊断和监控血栓性疾病，对判断血栓前状态意义也非常重大。2． 检测原理静止状态的血小板内分布着多种颗粒，如a颗粒、溶酶体颗粒等。这些颗粒表面存在着一些特定蛋白，如a颗粒表面有CD62p抗原，溶酶体颗粒表面有CD63抗原。 ...

前言 血小板活化试验，对于血小板功能、心血管疾病的研究，有重要意义。使用流式细胞仪进行多参数分析，可以特异灵敏地检测血小板表面标记，了解血小板的活化状态和反应性，并同时获得更多关于血小板的信息。在疾病监测、抗血小板治疗病人的筛选及治疗监测、预测并发症等方面有良好的应用前景。 使用推荐的三色流式分析方法检测血小板活化的优点是： 检测血小板的反应性。 了解血小板活化进程。血小板先发生膜糖蛋白变化，然后 ...

促细胞分裂剂激活单核细胞基本原理 ：本方法是通过促细胞分裂剂与细胞表面受体相互作用，在体外触发细胞的多克隆激活。根据所使用的促细胞分裂剂的不同，应答细胞可以是T淋巴细胞、B淋巴细胞，或两者同时，或者是单核细胞。 细胞激活可以通过细胞增殖、细胞因子分泌、表面抗原表达和/或细胞体积的增加进行检测。例如在使用B细胞激活剂时，可以通过多克隆免疫球蛋白的分泌进行检测。表1 常用的促细胞分裂剂和多克隆淋巴细胞 ...

This protocol describes a procedure for isolating human peripheral blood mononuclear cells (lymphocytes and monocytes) from a Buffy Coat (obtained from a blood bank). Platelets red blood cells and neu ...

Tissue Culture - Storage of Cell LinesMETHOD:Established hybridomas and other cell lines can be stored in liquid N2 using this method.Have everything ready before you start working with the cells (i.e ...

Freezing and Thawing cells Freezing It is best to freeze cells that are growing rapidly. With adherent cells it is easiest to set up 100 mm dishes give them fresh medium the day before you freeze them ...

Freezing Cells: 1. Trypsinize cells and harvest in the normal way. 2. Count a 200 ul aliquot and determine the total cell number. From this calculate the volume of media required ...

Freezing CellsContributor: Suprya JayadevDate: January 10 19911) Keep prepared solutions on ice.2) Determine total cell count of cells to be frozen. (e.g. 1 X 108 )3) Determine number of vials to be f ...

Cell Freezing Reagents / Solutions Cells! (at least 5 x 106). Foetal calf serum (FCS) heat inactivated at 65 � for 1 hr. Dimethylsulfoxide (DMSO). Freezing vials. Hi - Tech Cell freezer (polystyrene ...

Freezing and Thawing of Mammalian Cell Lines For long term storage of myeloma cells hybridoma cells T cells and other mammalian cell lines in liquid nitrogen and restoring them in culture.FreezingPr ...

染料染色法测定细胞数1）结晶紫检测法1．在96孔细胞培养板各孔中加0.1ml含5×104～10×4 WEHI-164细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液），37℃ 5％ CO2的二氧化碳培养箱中培养2～3小时，让细胞帖壁。2．用RPMI-1640培养液10倍递次稀释TNF标准品，根据需要3～5倍递次稀释待检样品，每孔加0.1ml稀释的标准品或待检样品，每个稀释度3个重复孔。对照 ...

CMC中效应细胞的制备1）用淋巴细胞分离液分离PBMC1．抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中，加2倍量磷酸盐（PBS）悬浮细胞。将此悬液小心加在淋巴细胞分离液上，400×g离心30分钟。2．离心后红细胞在管底，PBMC在血浆和淋巴细胞分离液的交界面。收集PBMC，用PBS洗涤细胞两次，每次离心150×g 10分钟。低速离心可以减少血小板沉淀，但细胞沉淀物较松散，去上清液时注意丢弃细胞。3．将细胞悬浮 ...

H脱氧胸苷释放法1）标记靶细胞1．用含5％小牛血清的RPMI-1640培养液将靶细胞配成2×106/ml，取10μCi（370kBq）HTdR加到1ml靶细胞中，37℃水浴标记4～6小时，每30分钟摇晃一次。2．用RPMI-1640培养液洗涤细胞3次，每次400×g 10分钟。用含5％小牛血清的RPMI-1640培养液将细胞浓度调整为1×105/ml备用。2）HTdR释放实验1．在96孔圆底细胞 ...

三磷酸腺苷检测法（ATP法）1．ATP反应液（Bio-Orbit）是粉末状混合物，含有荧光素、荧光素酶、0.5mmol醋酸镁、50mg BSA和0.1μmol无机焦磷酸。在4℃可以保存1个月。用前用10ml含2mmol/L EDTA的0.1mol/L pH7.75 Tris-醋酸缓冲液稀释。稀释液分装后可在－20℃长期保存。2．在已经完成促增殖或抑生长试验后的96孔细胞培养板中（每孔含100μl细 ...

用MTT检测法测定CMC1． Fen细胞培养于含10％小牛血清的RPMI-1640培养液中，在25cm2培养瓶中生长到接近汇合。用含0.05％胰蛋白酶，0.02％ EDTA的PBS消化细胞5分钟，洗涤后，用细胞培养液将细胞配成1×105/ml。2． 取96孔细胞培养板，每孔加0.1ml细胞悬液，在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培 养箱中培养24小时，让细胞帖壁。每孔加0.1ml效应细胞悬液 ...

单细胞CMC试验1．用细胞培养液等量混合效应细胞和靶细胞，30℃水浴10分钟。室温中250×g离心5分钟，去上清液。同量靶细胞不加效应细胞同样处理作为对照。2．用少量细胞培养液轻轻悬浮细胞，吸管上下吹打5～6次。这一分散细胞的步骤关系到试验的准确性和重复性，应当设法保持技术的一致性。取少许细胞悬液，稀释后直接在显微镜下计数效应细胞和靶细胞的结合率，即平均每100各淋巴细胞中结合了靶细胞的效应细胞的 ...

琼脂糖凝胶电泳检测调亡细胞1．用不同方法诱导细胞调亡后，取106调亡细胞，置1.5ml离心管中，用PBS洗涤一次。在微量离心机上全速离心5秒钟，去上清液。加入100μl含5mol/L异硫氰酸胍，100mmol/L 2-巯基乙醇的25mmol/L枸橼酸钠缓冲液pH7.0，在旋涡混悬器上混悬20秒钟，破坏细胞，变性蛋白质。2．加入50μl含7.5mol/L醋酸氨和0.8mg/ml糖原的水溶液，混匀；加 ...

从单个核细胞中分离T细胞1）用玫瑰花结形成试验分离E＋细胞1．制备AET-绵羊红细胞1）在刻度离心管中，用无菌的含5％小牛血清的Hanks液洗涤绵羊红细胞3次，每次离心500×g 10分钟。2）吸净上清液，测量红细胞比容。轻击试管分散红细胞，加入4倍红细胞比容量、新鲜制备的AET溶液，混匀。室温中反应30分钟。3）用无菌的含5％小牛血清的Hanks液洗涤AET-绵羊红细胞5次，每次离心500×g， ...

T细胞亚群的分离分离T细胞亚群，包括各种CD抗原阳性的亚群、αβ型T细胞受体阳性的T细胞或γδ型T细胞、或者其它表面标志不同的T细胞亚群，通常需要有相应的特异性抗体。用直接或间接免疫荧光染色，通过FACS分离细胞；或用抗体包被的免疫磁珠，通过磁场分离细胞；或用抗体亲和层析柱分离细胞。 ...

一、原理 人的羊水细胞能长成单层并可连续进行传代培养，但它们的一些特征与一般成纤维细胞不同。在羊水中存在着各种不同类型的胎儿细胞，依据其外形和生长特征可区分为以下三类：上皮细胞（E）、成纤维细胞（F）和羊水细胞（AF）。E细胞在胰酶消化的连续培养中不再生长，所以在培养过程中的生长期最短。AF细胞在再培养中一开始就长得很好，染色体分析大多用这类细胞。F细胞在再培养中潜在的生长期最长，在较老的羊 ...