细胞调亡的研究方法：琼脂糖凝胶电泳

琼脂糖凝胶电泳检测调亡细胞

 

1． 用不同方法诱导细胞调亡后，取 10⁶ 调亡细胞，置 1.5ml 离心管中，用 PBS 洗涤一次。在微量离心机上全速离心 5 秒钟，去上清液。加入 100 μ l 含 5mol/L 异硫氰酸胍， 100mmol/L 2- 巯基乙醇的 25mmol/L 枸橼酸钠缓冲液 pH7.0 ，在旋涡混悬器上混悬 20 秒钟，破坏细胞，变性蛋白质。

2． 加入 50 μ l 含 7.5mol/L 醋酸氨和 0.8mg/ml 糖原的水溶液，混匀；加入 300 μ l 100 ％乙醇， 4 ℃保存过夜。

3． 在微量离心机上全速离心 30 分钟，去上清液。加入 75 ％乙醇同样离心洗涤沉淀物 2 次。用 20 μ l 含 100 μ g/ml 无 DNA 酶的 RNA 酶的 TE 缓冲液消化 RNA ， 37 ℃ 30 分钟。加入 10 μ l 甘油和少量溴酚蓝，直接点样。

4． 用 50ml TAE 溶解 2g 琼脂糖，加入 0.25 μ g/ml 溴乙啶。倒板后加样，用 100bp DNA 标记物作为标记。 25mV 电泳过夜。在紫外线下观察结果。调亡细胞的 DNA 呈相差 200bp 的条带的梯形图。