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        细胞生长检测8:三磷酸腺苷检测法(ATP法)

        互联网

        5302

         

        三磷酸腺苷检测法( ATP 法)

         

        1. ATP 反应液( Bio-Orbit )是粉末状混合物,含有荧光素、荧光素酶、 0.5mmol 醋酸镁、 50mg BSA 0.1 μ mol 无机焦磷酸。在 4 ℃可以保存 1 个月。用前用 10ml 2mmol/L EDTA 0.1mol/L pH7.75 Tris- 醋酸缓冲液稀释。稀释液分装后可在- 20 ℃长期保存。

        2. 在已经完成促增殖或抑生长试验后的 96 孔细胞培养板中(每孔含 100 μ l 细胞培养液),每孔加 0.1ml ATP 释放因子,室温中反应 5 分钟。取另一块 96 孔细胞培养板,从第一块板的各孔中吸 0.1ml 细胞溶解物到第二块板的相应各孔。

        3. 在低于 25 ℃中,将第二块板置自动多孔荧光检测仪中。用自动加样器,每孔加入 20 μ l ATP 反应液,立即检测 10 秒钟的荧光强度。温度升高,检测敏感性就下降。

        4. RLU Y 轴)对细胞因子标准品的稀释度( X 轴)作标准曲线,根据标准曲线确定待测样品中细胞因子的含量。

         

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