细胞技术

cwqq2003 请问大家使用eNOS的抑制剂L-NAME后对eNOS的磷酸化有影响吗？freecell 以前的研究结果：http://www.actaps.com.cn/qikan/cpaper/zhaiyao.asp?bsid=599454jempoo Circulation. 2002 Mar 26;105(12):1497-502.Pretreatment with L-NAME, a nonselective NOS inhibitor, had no effect on Akt ...

wywdxfsh 在ncbi上查不到这个咚咚，只有转录因子 transcription factor 4我做的小鼠的freecell T细胞因子(TCF)/淋巴增强因子(LEF)是Wnt信号传导通路的主要信号分子。TCF/LEF家族包括LEF-1、TCF-1、 TCF-3、TCF-4。其中TCF-4是Wnt信号传导通路的一个重要的分子，并且在肿瘤的发生过程中起重要作用.SEE:http://www.nature.com/onc/journal/v2 ...

doczou 我的实验中要检测ATF4,ATF6的表达情况是上调还是下调，是应用western blot方法检测，还是应用实时定量PCR来检测合适，哪个更加有说服力，我想节约时间和试剂。谢谢各位大侠指点迷津！！ecust小熊 realtime PCRzhuqueleee 1，western blot,实时定量PCR都是比较好的实验方法，只是一个从蛋白一个从核酸水平验证，可以同时做。实时定量PCR如果要买全进口的然后用荧光探针的话比较贵 ...

aspirin713 各位好，拜托大家给点建议我最近在做FCM，主要是测药物对黑色素肿瘤细胞的生长周期的影响，用的方法是FCM PI染色的方法。但是70%的乙醇固定之后，离心后可以看到有大量的细胞贴壁，把上清吸出去以后，可以看到沉淀留在底部，但是加入了PBS吹打均匀以后再离心。不管怎么样延长时间，或加大转速，就是没有细胞离到壁上，请问大家，这是怎么回事。应该如何避免上面这样的问题出现呢？！干细胞之星 固定的时候出问题了细胞估 ...

mugua519 dominant negative技术和siRNA技术都是可以特异性抑制细胞内某种蛋白的功能，而达到实验研究的目的，这两种技术之间的比较上有什么优劣呢？siRNA技术相对已比较成熟，既然dominant negative技术存在，那肯定应该有它独到的地方，那它有什么特点呢？什么样的蛋白可以用这个技术呢？谢谢指教！zfv2007 dominant negative有一种意思是“显性失活”，当你研究一个蛋白质的功能 ...

umay 我在做一个基因敲除之后细胞内主要信号通路的变化，需要最磷酸化蛋白，我血清饥饿过夜，为了使和对照组的细胞出去同一个水平，但不知道大概需要加血清释放多长时间，在线急等，谢谢啦！ecust小熊 做预实验去smallstone80 一般24小时本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

urbest 请教各位战友一个比较低级的问题：Janus激酶细胞信号转导及转录活化因子，即Janus kinase - signal transd ucer and activator of transcription,JAKs-STATs，该通路是当前细胞因子研究领域的热点 ，许多细胞因子和多数造血生长因子均通过此途径完成细胞信号传递过程，它还是多种炎症 介质的重要信号交汇(cross-talk)和调控系统之一。我就想问一下：JAKs-STAT3这两个单 ...

xupingcs 我的实验有部分和wnt/ca2+通路相关,可不知道有无wnt/ca2+通路的抑制剂.查了很多资料,也没见这方面的报道.另: 我只想抑制ca2+通路,不抑制wnt经典通路和JNK通路.期待答疑,谢谢!xupingcs 怎么没人解惑呀?期待中......doctormy XeC blocks IP3-induced Ca2+ release (IC50 = 358 nM) without interacting with the IP3-binding site, suggesting a ...

syo820924 急需,谢谢共享!liuxin20040601 从文献上下的图片liuxin20040601 还有一张。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

圈子圈套 困惑很久了，请有经验 有爱心的站友帮助一下！发现关于wnt的文献中，几乎都要做报告基因检测实验，有的用TOPflash/FOPflash，有的用PGL3 ，请问两者之间区别是什么，最后检测都需要用荧光照度仪吗？如果实验室没有的话可以用别的仪器取代吗？或者说，用别的实验思路去取代这个实验一下可以吗？我的实验是想做某一抑癌基因对wnt经典通路的影响，可不可以使抑癌基因在某癌细胞中再表达后，直接检测靶基因Cyclin ...

weskerstar 请问分子生物学对突变是怎么描述的例如，对于GIST的D842V突变是什么东西，点突变？D是什么意思？842是什么意思，V是什么意思？Fasta921 D为天冬氨酸的缩写，V为缬氨酸的缩写。意思是第842位氨基酸由原来的天冬氨酸突变为缬氨酸。bioferry 突变也可以由商业化公司帮助完成。www.bioferry.cn 百福锐，专业加速您的科研项目！---请勿发表商业信息本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的 ...

westernblotx 最近看到一些研究转座子的文章，由于陆续有研究阐述转座与环境胁迫表达调控之间的关系，所以我比较感兴趣，但是对这方面知之甚少，请各位有相关经验的战友帮忙。1，请教一些相关技术。比如excision frequncy 的测定，我没有搞明白。2，按照大的分类，retrotransposon和其他DNA transposon的功能和调控机制研究有何不同？通常应该怎样研究？3， 转座活性的鉴定通常有哪些方法？4, 如何改造 ...

clyztepp 请问各位高人，内源性co的定量检测方法，除了间接法，加Na2S2O4,利用分光光度计测COHb之外，最近有没有什么新的检测方法，最近试验要测co.谢谢了freecell 建议自己先看看文献吧。http://www.google.com/search?hl=en&client=firefox-a&rls=org.mozilla%3Azh-CN%3Aofficial&hs=MK6&newwindow=1&q=%E5%86%8 ...

sumu2006 Fura-2 AM 可以测细胞内钙离子浓度，请教各位高人，是什么机理？分离线粒体出来后，可以用这个染料测钙离子浓度吗？freecell Fura-2 AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fura-2 AM的荧光比较弱，最大激发波长为369nm，最大发射波长为478nm，并且其荧光不会随钙离子浓度改变而改变。Fura-2 AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fura-2，从而被滞留在细胞内。Fura-2可以和钙离子结合，结 ...

raftcham 本人在做表遗传方面研究，主要是组蛋白修饰方面的，EZH2是我感兴趣的方向之一，另外是组蛋白磷酸化方面也是我关心的，不知道这里有没有同行？不知道有没有机会和大家交流文献。这里先推荐大家一篇文献题目：Polycomb protein Ezh2 regulates pancreatic beta-cell Ink4a/Arf expression and regeneration in diabetes mellitus期刊是Genes & Devel ...

licanming 请问有无人将AKT用作处理因素的，即将AKT作用于细胞后检测下游分子的变化，或者有无看过相关的文献啊？怎么确定用量和作用时间？licanming 是不是没有人会这样做的？或者说这样做是行不通的？再请问大家有无AKT的激动剂，能够激活细胞内的AKT活性？wangke80 我也想了解，包括erklicanming 我看过有些文献是用转染的方法将带有激活型的AKT转到细胞内，让AKT持续高表达，但这样做比较麻烦 ...

hhyy601 如果用分子生物学对一蛋白在转录水平上是升高，在蛋白水平下降，说明什么问题？怎么解释？zjubell 1.首先证明你的实验做的没错。（你基因水平是怎么检测的，蛋白水平是怎么检测的）2.你做基因水平时，做的是全转录本的检测，还是只检测了一小部分，比如3末端。因为有一些基因会有多种转录本。3.考虑一下是否有其他修饰，如甲基化，糖基化，以及3‘，5’端的增强子之类的。我觉的问题出在1,2的可能性最大。naobeir 是单纯的 ...

jeremyking 前几天订购了FLUO-4 AM, 因为五一放假，同事就放到4度的冰箱中了，第二天才知道这个事。不知道还能不能用，请各位指教，不然要重新定试剂了。谢谢jeremyking 自己顶一下，希望有人知道答案moxucheng 可以用，没问题本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

zhanghaopeng 大家是按照什么浓度稀释、给药的呢？zhanghaopeng 自己顶一下吧！doctormy DAPT在体外的应用浓度从50 nM至50µM 不等，要根据细胞类型，作用时间等因素综合考虑，最重要的是参考文献，要有据可依。通常DAPT用DMSO溶解配置成10 mM的 stock solution ，溶解后保存在−70°C ，并在1个月内用完。zhanghaopeng 好的，谢谢啦！elegance_janet 请问DAPT是否可以通过血 ...

vacancy 用刺激物刺激引起某个细胞因子的激活，克隆它的启动子到荧光素酶报告质粒上，实验证明有10倍以上的激活。但是用荧光定量（相对）却检测不到它RNA的表达变化。请问大家有什么调控机制参与到其中，有的话怎么验证呢？tonycat 荧光报告系统的实验是证明了该刺激物能激活该细胞因子的转录，但如果该刺激物同时会加快该细胞因子RNA降解的话，可能会出现上述情况，所以它的时间效应你要看一下summityoung 荧光素酶 ...