细胞技术

bjx2325 请教，有什么比较好的办法对甲基化含量进行测定么，谢谢！shylook 1.Msp I和Hpa II联合酶切 后跑胶 根据片段长度变化 看总体甲基化变化2.CpG抗体3.甲基化敏感性高分辨熔解分析4.焦磷酸测序5.还可以用MBD珠子富集甲基化片段bjx2325 shylook wrote:1.Msp I和Hpa II联合酶切 后跑胶 根据片段长度变化 看总体甲基化变化2.CpG抗体3.甲基化敏感性高分辨熔解分析4.焦磷酸测序5.还可以用MBD珠子富集甲 ...

zxsys123456 想要查阅有关模拟磷酸化方面的文献，有谁知道该怎么查？或者指点一下该怎么做突变？bigbang_0_0 突变成带负电荷的氨基酸，比如谷氨酸或天冬氨酸豆龟 zxsys123456 wrote:想要查阅有关模拟磷酸化方面的文献，有谁知道该怎么查？或者指点一下该怎么做突变？请问楼主，找到相关文献了吗？酪氨酸的磷酸化怎么模拟？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为 ...

tutufei miRNA如何构建到慢病毒载体？与基因构建到质粒载体有何区别吗？最好有具体的实验步骤，或相关资料，不胜感激！大鹏鸟 本质上没啥区别的。步骤：1、设计好premiRNA----带有相应酶切位点2、化学合成3、退火形成双链4、连接到相应载体5、转化感受态，6、酶切或者PCR鉴定,测序7、扩增阳性质粒，包装慢病毒，进行细胞学实验。其实不建议自己构建miRNA慢病毒质粒，现在都已经商品化了，直接买来就可以用，既节约时间，又 ...

若水无涯 请问有谁做过3’末端切平啊？我要做平末端连接，先将目的片段通过限制酶进行酶切，可两端产生的都是3'突出末端，不知道该用那种酶进行切平比较好，看见有好多都是补平的体系，现不知道具体用哪个公司的那种酶效果会比较好，是个新手，谢谢了！sgc7901 neb不错，值得推荐。NEB 若水无涯 您好！您如果要做3‘端的切除，NEB有以下几种酶建议您可以考虑： DNA Polymerase I, Large (Klenow) Fragment and T4 DNA Poly ...

zhichunelan 邮件的内容如下： Please try S.Choi. I think that the PI moved to a university, although I am not 100% sure. I did EM work for them and Dr. Choi is the contact person. 请问其中PI是什么意思，课题组吗？EM work又是什么意思，是说的一部分工作吗？我以前是临床专业，现在刚刚开始涉猎分子细胞生物学方面的研究，各方面都有很多欠缺，希望大家多多帮忙。也希望有类似关于邮件翻译问题的 ...

zhangtt0530 各位，我做此连接两个月了，始终连不上，此图为连接产物跑电泳，第2道为pet32a载体单切自连，肉眼看出现两条带；第4道为载体与片段连接，在载体位置有一条带，下面还出现n条带，6道为载体单切回收，7道为载体双切回收，8道为片段双切回收。载体与片段摩尔比应该能保证在1:6-1:10之间，10μl连接体系，总DNA含量在60ng左右，用的NEB连接酶，双酶切用的takara酶，酶切回收用水洗脱，4℃连接2 ...

zhangdepu_410 有做出过或者是看到过关于NF-kB激活了，但是snail却被抑制的实验么？我最近做一个实验就出现了这样的结果，查了一些文献NF-kB都是激活snail的，让我很是困惑，希望大家帮帮我！感激不尽！paroxysm 1.检测的NF-kappaB是转录水平上的激活(EMSA等等)还是磷酸化形式的上调(WB)，这里面有些不同。2.检测snail的负调控元件和抑制通路。zhangdepu_410 paroxysm ...

dyp1998 我想请问各位前辈，我想在大鼠细胞中阻断MAPK通路，请问MAPK通路抑制剂有分种属的吗？除了SIGMA公司的还有哪个公司的比较好啊？谢谢。dyp1998 那位大侠能回答我这个问题啊，谢谢了！dyp1998 顶上去蛋蛋豆豆 我也要买这个抑制剂，不知道是选择PD98059还是U0126xiaoxiaoga selleck chemicals 的抑制剂我用过 觉得性价比要比sigma的高很多，而且送货周期也比较短，前些日子还用了 ...

xingzhe20100228 各位实验前辈好，本人课题需要检测药物处理后wnt/beta-catenine的活性变化，用Luciferase Reporter方法，如何做？没经验，迫切需要各位高手前辈指点。是不是不用转染，直接加裂解液啊？文献都是一笔带过，晕得找不着北，不胜感激！毕业是老板不急的，怎样做你自由发挥，就这点钱，不够你自己再想办法，真希望有人管哪！毕业在即，要命呢！shylook 文献怎么可能是一笔带过呢多看文献 绝对 ...

兔巴哥 请看下图：图片描述：A diagram of the signaling pathways acting on β-catenin (shown in red) that are involved in breast cancer. The most studied of these is the Wnt pathway, which stabilizes β-catenin by inhibiting its N-terminal phosphorylations and ubiquitination. This allows β-catenin to accu ...

tongenjuan 本人对试验基本不通，刚要开始做试验，涉及到siRNA干扰技术，上网查了一下，可是不是很明白。求助各位朋友教教我。试验大概要分别干扰3个不同的基因表达，在肿瘤细胞中做，是用体外转录siRNA还是shRNA表达载体好？我都要准备什么？shylook 干扰掉直接做wb或者其他检测的话 化学合成的就够了细胞只能用一次一般不会传代 做一次实验就要转染干扰一次要做后期实验比如干扰后一周要用细胞的话shRNA表达载 ...

dxhly 我每次用PROMEGA胶回收试剂盒回收时，效率都很低是什么原因？我的目的片段为8.8kb左右，我大概加了6ug的DNA进行电泳，胶回收后最后用30ul elution Buffer 洗脱DNA时，浓度总数很低，一般在10ng/ul以内，影响后续实验，请各位高人指点，不胜感激！shylook promega的不应该这样差其实天根的就摇菌很好了割胶时尽量割小点严格按protocol操作xxzjcg 可以多加DNA上样，再割胶 ...

wj2002yx 各位大侠好：本人最近做的是关于线粒体损伤相关的研究，用线粒体抽提试剂盒，抽提的线粒体，但是在提取的线粒体的纯度，以及是否是线粒体方面，急需要一个形体上的支持，但我们学校没有电镜设备。所以想用激光共聚焦显微镜，不知道是否能看到线粒体的形态，不知道给位前辈有没做过的，能不能给一个详细的protocol。谢谢了~~~wj2002yx 没有人关注的吗？？自己先顶顶~~~天乐盼盼 帮楼主顶一顶！dongweiguang 帮楼 ...

liyouqiang666 如上图所示，请问Dgrc8,再上标fl/fl，是什么意思呢？liyouqiang666 档住看不到了，我重发一个．丝路蓝缕 表示该基因被Cre锚定，该小鼠与表达Cre酶的转基因小鼠交配后可以得到该基因敲除小鼠本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

小小学药者 请问各位大侠，我看说明书上说化学合成的siRNA 用DEPC水震荡溶解 有位师姐建议说类似于引物需4度过夜 这样才能溶解完全 但这样会不会使得siRNA降解呢？ 是否可加DEPC水溶解后立即用于转染呢？baby_susan 一般操作步骤是：1，拿到在公司合成的siRNA后，一般是干粉状得，先高速离心半分钟左右，目的是使在运输过程中飞到管壁上的粉末积聚到管底。2，然后根据实验浓度和公司提供的说明书加适量的DEPC水进行溶解，， ...

泡泡龙2005 最近想做siRNA，干扰效果的检测除了RT-PCR和WB以外，用流式检测可以吗？WB怕细胞不够用的，请教各位大虾！谢谢可以ibsbio 可以的！但是必须在RT-PCR，WB有一定效果基础上！biolinkphilic 主要是看你那个蛋白的表达是不是高表达的，如果不是高表达的话，用流式更难检测出来。因为流式缺乏一个信号放大的过程。华因康基因公司 为什么不做shRNA呢？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思 ...

drink51 大家好，最近遇到一个很是头疼的问题。Feulgen染色法是什么东东？在网上搜了很多资料，但是解释都不是很好。今天突发奇想，到我们丁香园来求助，希望能够得到满意的答案。黄立坤 这是我在资源网站上http://goo.gl/9WJmO看到的，上传人是徐若雨，找了半天才解决你这个问题。Feulgen染色法：1924年建立，对DNA进行特异性染色基本原理：细胞中的DNA在60℃时用1mol/L HCI会解离脱氧核糖核酸，使 ...

295546 如题。。。我看有些人说是断裂成200bp的片段，是否有人做过断裂时的长度特性？断裂点的偏好性？我很迷茫，如果是双链断裂 结构是怎么样的？是粘末端吗？多少碱基的粘末端？如果是单链断裂，有什么特性？还是两者都有？频率多少？大家如果可以，发点文献给我看一下，谢谢！yzbsmsz http://hi.baidu.com/namevirus/blog/item/a1e07905d5195462030881f6.htmlhttp://w ...

nytimes2008 最近要做荧光素酶检测，用的是Progema的 psiCHECK2 载体的双报告基因检测载体。但是网上常说的E&K公司的96白板好像都没地方买的到。有没有人做过了的。求助下。 我用的是BioTek Synergy2 多功能微孔板检测仪来检测的。nytimes2008 没人知道吗。otherwise nytimes2008 wrote:最近要做荧光素酶检测，用的是Progema的 psiCHECK2 载体的双报告基因检测载体。但是 ...

joo 如题，A B C是3个蛋白，目前见到到A结合B使B-C复合物减少，我的问题是这样我能说A与B的结合竞争性抑制了B与C的结合吗？因为A结合B还有可能使B发生了变构从而影响了其与C的结合，在写论文的时候这个“竞争性"抑制的词是不是准确呀？westernblotx joo wrote:如题，A B C是3个蛋白，目前见到到A结合B使B-C复合物减少，我的问题是这样我能说A与B的结合竞争性抑制了B与C的结合吗？因为A结合B还有可能使B发生 ...