生物化学技术

相关专题 一、实验目的1.熟悉高效液相色谱的原理及分析方法。2.掌握高效液相测定脂溶性维生素的方法。二、实验原埋样品中的维生素A 及维生素E 经皂化处理后，将其不可皂化部分提取至有机溶剂中。用高效液相色谱法C18反相柱将维生素A 和维生素E 分离，经紫外检测器检测，并用内标法定量测定。该法最小检出量分别为：VA：0.8ng ；α-E：9l.8 ...

相关专题 层析技术概述引言层析法又称色层分析法或色谱法(Chromatography)，它是在1903~1906年由俄国植物学家M. Tswett首先提出来的。他将叶绿素的石油醚溶液通过CaCO3管柱，并继续以石油醚淋洗，由于CaCO3对叶绿素中各种色素的吸附能力不同，色素被逐渐分离，在管柱中出现了不同颜色的谱带或称色谱图(Chromatog ...

相关专题 一、实验目的掌握用费林试剂法测定总糖的原理和方法。二、实验原理还原糖是指含有自由醛基(如：葡萄糖)或酮基(如：果糖)的单糖和某些二糖(如：乳糖、麦芽糖)。在碱性溶液中，还原糖能将金属离子(Cu2+，Hg2+，Ag+等)还原，而糖本身被氧化成各种羧酸类化合物。该特性常用于糖的定性和定量测定。本实验采用费林试剂热滴定法，费林试剂是氧化剂 ...

相关专题 一、实验目的1．掌握淀粉的提取方法，2．熟悉淀粉跟碘的反应和淀粉水解生成葡萄糖的反应。二、实验原理淀粉主要由直链淀粉(约占20％)和支链淀粉(约占80％)组成。直链淀粉能溶于热水，跟碘作用显现蓝色。支链淀粉不溶于水，但能在水中胀大而润湿、跟碘作用显现紫红色。酸性氯化钙溶液与磨细的含淀粉样品共煮，可使淀粉轻度水解。同时钙离子与淀粉分子 ...

相关专题 一、实验目的掌握果胶提取的原理，学习胶冻制备的工艺。二、实验原理果胶是高分子糖类化合物，是一种植物性天然胶体物质，广泛地存在于苹果、山楂和柑桔类等的果实及其它植物体内。果胶在植物体中，以原果胶、果胶和果胶酸三种形式存在。原果胶用稀酸处理或与果胶酶作用时可转为可溶性果胶。可溶性果胶的基本结构是多聚半乳糖醛酸，其中部分羧基被甲醇脂化为甲 ...

相关专题 一、淀粉含量的测定(旋光法)(一)实验目的1.熟习旋光仪的使用方法。2.了解旋光仪测定淀粉的原理并掌握其具体方法。(二)实验原理淀粉(starch)是植物的主要能量贮藏物质，主要存在于种子、块根和块茎中。淀粉不仅是重要的营养物质，并且在工业上的应用也很广泛。将磨细的含淀粉样品与酸性氯化钙溶液共煮，可使样品中淀粉轻度水解，同时由于钙离 ...

相关专题 一、实验目的1.加深了解熟悉粘多糖的化学性质。2.掌握肝钠素的测定原理和方法。二、实验原理肝素是一种粘多糖，其多肽链带有许多阴离子基团，如羧基、磺酸基等，使肝素具有强的负电荷性，能与阳离子和带正电荷的分子结合成复合物。肝素可以与Na+结合生成肝素钠，具有抗血凝功能。其功能性效价的测定有两种方法：生物鉴定法和天青A 比色法。本实验采用 ...

相关专题 一、实验目的1.加深了解磷脂类物质的结构和性质。2.掌握卵磷脂的提取鉴定的原理和方法。二、实验原理磷脂是生物体组织细胞的重要成分，主要存在于大豆等植物组织以及动物的肝、脑、脾、心等组织中，尤其在蛋黄中含量较多(10%左右)。卵磷脂和脑磷脂均溶于乙醚而不溶于丙酮，利用此性质可将其与中性脂肪分离开；此外，卵磷脂能溶于乙醇而脑磷脂不溶，利 ...

相关专题 一、实验目的1.了解凝胶层析的基本原理。2.掌握利用凝胶层析法测定蛋白质分子量的实验技能。二、实验原理凝胶层析(gel chromatography)是20世纪60年代发展起来的一种分离分析方法。其法有许多同义词如凝胶过滤、分子排阻层析、分子筛层析、凝胶渗透层析等。凝胶层析是利用具有一定孔径大小的多孔凝胶作固定相的层析技术。凝胶的孔 ...

相关专题 一、实验目的1.掌握磷硫铁法测定血清胆固醇的原理与方法。2.深入了解血清胆固醇的性质及其在体内的代谢。二、实验原理血清经无水甲醇处理后蛋白质被沉淀，胆固醇则溶解在无水甲醇中。甲醇提取液与硫磷铁试剂反应后生成有色物质，其呈色度与胆固醇含量成正比，可于550nm 波长下进行比色测定。正常血清中胆固醇的含量有随年龄增大而增加的趋势，其平均 ...

相关专题 一、实验目的1.了解肝糖原的性质并掌握其提取方法。2.熟悉肝糖原的鉴定方法。二、实验原理糖原属于高分子糖类化合物，是动物体内糖的主要储存形式，在肝脏内储量较为丰富。糖原在体内的合成与分解代谢，对血糖浓度的调节起着重要的作用。糖原微溶于水，无还原性，与碘作用生成红色。常用的提取肝糖原的方法是将新鲜的肝组织与石英砂共同研磨以破坏肝组织， ...

相关专题 简介亲和层析(Affinity Chromatography)是利用生物分子间专一的亲和力而进行分离的一种层析技术。人们很早就认识到蛋白质、酶等生物大分子物质能和某些相对应的分子专一而可逆的结合，可以用于对生物分子的分离纯化。但由于技术上的限制，主要是没有合适的固定配体的方法，所以在实验中没有广泛的应用。直到60年代末，溴化氰活化多 ...

相关专题 纸层析是分配层析法的一种，其以滤纸为惰性载体，展层溶剂大多是由水饱和的有机溶剂组成。滤纸纤维的—OH 基的亲水基团可吸附有机溶剂中的水作固定相，有机溶剂作流动相，当流动相沿滤纸自下向上展开，称为上行层析；反之，流动相自上向下移动，为下行层析。纸层析法主要依据混合组分对两相分配系数的差异而进行分离的，同时也存在着某种程度的吸附作用和离 ...

相关专题 一、 实验目的1.了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法。2.学习纸层析法的操作技术，分析未知样品氨基酸的成分。二、 实验原理用滤纸为支持物进行层析的方法，称为纸层析法，它是分配层析法的一种。纸层析所用的展层溶剂大多是由水饱和的有机溶剂组成。滤纸纤维的—OH 基的亲水性基团，可吸附有机溶剂中的水作为固定相，有机溶剂作为流动相，它沿滤纸自 ...

相关专题 一、试验目的了解并掌握垂直板凝胶电泳的使用方法。二、实验原理聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳是以聚丙烯酰胺凝胶做支持物的一种区带电泳，由于此种凝胶具有分子筛的性质，所以本法对样品的分离作用，不仅决定于样品中各组分所带净电荷的多少，也与分子的大小有关。其次，聚丙烯酰胺凝胶电泳还有一种独特的浓缩效应，即在电泳开始阶段，由于不连续pH 梯度的作用 ...

相关专题 一、实验目的1.掌握DNS 分析法测定氨基酸的原理与方法。2.进一步熟悉薄膜层析的操作。二、实验原理荧光试剂二甲氨基萘磺酰氯即DNS—Cl(Dansyl—Cl)，能与所有氨基酸的氨基结合，生成荧光物质DNS—氨基酸。DNS—Cl 也能与蛋白质或多肽的游离氨基结合，生成DNS—蛋白质或DNS—肽，经酸水解后释放出DNS—氨基酸。各种D ...

相关专题 一、实验目的1.熟悉蛋白质的沉淀反应、颜色反应和两性反应及其机理。2.掌握蛋白质等电点的测定方法及其原理。3.掌握蛋白质电荷的测定方法及其机理。二、实验原理(一)蛋白质的沉淀反应原理蛋白质的水溶液是一种比较稳定的亲水胶体，这是因为蛋白质颗粒表面带有很多极性基团，如—NH3+，—COO-，—SH，—CONH2等和水有高度亲和性，当蛋白 ...

相关专题 一、试验目的1.了解旋光法测定谷氨酸的原理。2.掌握旋光法测定谷氨酸的操作步骤。二、实验原理谷氨酸钠分子结构中含有一个不对称碳原子，具有光学活性，能使偏振光面旋转一定角度，可用旋光仪测定其旋光度。三、试剂与仪器仪器旋光仪(精度±0.01°)备钠光灯(钠光谱D 线589.3nm)。试剂盐酸四、操作步骤1.称取于98±1℃干燥5h 的样 ...

相关专题 一、实验目的1．初步掌握正交法(正交试验设计法)的使用。2．运用正交法测定底物浓度、酶浓度、温度和pH 值这四种因素对酶活力的影响。二、实验原理酶的催化作用是在一定条件下进行的，它受多种因素的影响，如酶浓度、底物浓度、温度、抑制剂和激活剂等都能影响酶催化的反应速度。通常在其他因素恒定的条件下，通过某一因素在一系列变化条件下的酶活力测 ...

相关专题 一、实验目的本实验通过 L-谷氨酸的测定学习华勃氏呼吸仪的使用方法。二、实验原理大肠杆菌菌体内含有L－谷氨酸脱羧酶，能专一的催化L－谷氨酸脱羧，释放出二氧化碳。华勃氏呼吸计法是一种微量检压技术，可用于测定微生物和组织代谢时所发生的气体量的改变，如氧的吸收和CO2的产生。在恒温、恒容情况下，如果华勃氏呼吸计所带瓶内气体的量发生改变，则 ...