PCR技术

北大医学部的新英格兰医学发信站: BBS 水木清华站 (Wed Dec 15 15:51:58 2004), 站内基础医学院神经生物学系于常海教授所带领的课题组在SARS病毒早期检测方面取得突出进展，其研究成果近期发表于国际顶尖医学类杂志《新英格兰医学》（《NewEngland Journal of Medicine》）(2004, 350: 1577-1579)，论文题目为Boosting the sensitivity of real-time polymerase-chain-re ...

PCR常见问题总汇PCR产物的电泳检测时间　　一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带　　PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底 ...

基本PCR引物设计参数引物设计的目的是在两个目标间取得平衡：扩增特异性和扩增效率。特异性是指发生错误引发的频率。特异性不好或劣等的引物会产生额外无关和不想要的PCR扩增子，在EB染色的琼脂糖凝胶上可见到；引物效率是指在每一PCR循环中一对引物扩增的产物与理论上成倍增长量的接近程度。①引物长度；特异性一般通过引物长度和退火温度控制。如果PCR的退火温度设置在近于引物Tm值（引物/模板双链体的解链温度）几度的范围 ...

请高手帮忙设计一对引物用于RT-PCR,有原基因全序列，我查了国外国内的文献上的引物，经PrimerPrimer5.0验证发现都不太好，自己又从来没有设计过引物序列，故恳请各位有经验的高手帮忙设计一下，多谢！！基因序列如下：ORIGIN1 gggggggggg atttagagac ttgctcttgc actaccaaag ccacaaagca gccttgcaga61 aaagagagct ccatcatgcc tggctcagca ctgc ...

做RT-PCR可能遇到的一些问题，自己对症下药吧问 题1.RT-PCR 灵敏度：在琼脂糖凝胶分析中看到少量或没有RT-PCR产物可能原因：1） RNA被降解建议：使用前在变性胶上分析RNA以验证完整性使用良好的无污染技术分离RNA在将组织从动物体取出后立刻处理在100%甲酰胺中储存RNA2）RNA中包含逆转录抑制剂建议：通过乙醇沉淀RNA除去抑制剂。用70% (v/v) 乙醇对RNA沉淀进行清洗。可以加入糖元 (0.25μg到0.4μg /μl) ...

:(我需要扩增一段长约700bp的启动子区域，做过梯度，但每次跑出来的条带很浅，而且会随着电泳时间的增加逐渐变淡，同时，引物二聚体一直很明亮。后来做了阴性对照，竟然也出现一样的条带。我们怀疑是受了污染，但也说和引物有关。:?):?):?)所以在此求教各位帮忙提点参考意见。1 gtgcagtggc tcaatctcgg ctcactgcaa gctccgcctc ccaggttcat gccattctcc61 tgcctcagcc tacatagtag ...

大伙好，我购买Chemicon公司的CpGenome DNA Modificatio Kit 打算五月开始做，希望以后一起交流一下甲基化分析的实验技术。QQ：395848659Here are some online resources for methylation studyCpG island prediction:CpG Island SearcherCpG PlotMethPrimerCpGProD (CpG Island Promoter Detection) newCpG ...

第二届"荧光PCR－基础与应用"研习班第一轮通知(2006年10月31－11月4日，厦门)荧光PCR技术在疾病的快速诊断、病原微生物的耐药检测和基因突变检测等领域发挥了重要的作用。为了使更多的检验人员或研究人员能够尽快掌握该技术，厦门大学分子诊断实验室将继续与国外著名科学家合作，举办第二届"荧光PCR－基础与应用"研习班。本届研习班将在成功举办第一届研习班并获得广泛好评的基础上，进一步优化完善培训课程内容，融入荧 ...

In September 1993 Higuchi et al. published a report in the journal Biotechnology (NY). Titled “Kinetic PCR analysis: real-time monitoring of DNA amplification reactions,” the paper described the technique that would come to be known as Real-Time PCR (for more info, click here). In the original re ...

jiangjun82313 wrote:发表一点不同看法:1. 相对定量还是有相当市场的, 大家看文献即可知道.2. 相对定量(2-2deltCt法)需要验证扩增效率, 且扩增效率接近100%. 在你提到的哪篇文章里有: (1+E)-△△CT, 2 -△△CT是当二者的扩增效率接近1时才能得到.3. 选择一个组织的检验扩增效率就可以, 因为扩增效率主要与PCR条件有关.4. 是每个组织都要做三个重复,然后取平均值,然后再在一组小鼠的相同组织中取平均值和内参基因相减. 可以分开 ...

实时定量PCR用于基因的定量分离——正在兴起的一项技术前言：目前许多关于定量PCR的实验报道证实了定量PCR由一门实验技术向科学研究的大的方向的转变。定量PCR有许多用途：测量mRNA表达的水平，DNA的拷贝数目，转基因的拷贝数目和表达分析，等位基因的鉴定和测量滤过性病毒的浓度测定。实时定量PCR的用途的应用范围非常广阔，而且它能够对菌种的增殖过程中低成本的反应器和反应物进行检测。成功的运用实时定量PCR并 ...

刚开始作RT-PCR,让同学帮我设计了三个基因的上下游引物，如下： Primer A (bp233C): 5'-GAATTCACCACACGGCCATTGAAGCA-3'Primer B (bp25): 5'-AAGCTTCACATGGACGAGGAGGAGAC-3'Primer Balance: -A- -B- CommentLength 26 26% GC 50 53 3 % differenceTm(癈) 78 71 7 C?differenceTm (2nd round) 84 80 4 C?differencePrimer Ca ...

OLIGO 是一个从序列文件中搜索和选择寡核苷酸的多功能程序，应用于聚合酶链反应(PCR),DNA测序，定点突变及各种各样的杂交研究。OLIGO根据最近邻热力学值计算寡核苷酸的杂交温度和二级结构。 这个好工具也用于构建合成基因，在已合成的基因中发现适当的序列引物，发现和多元化一致的引物和探针， 甚至发现蛋白质潜在的限制位点。OlIGO 产品特色：1. 分析TM和内部稳定性，绘制溶解温度图和稳定性图；2. 给出寡核苷酸的重要相关信息；3. 显示 ...

大家好！我打算做半定量RT-PCR，把在文献上查到的引物（用来做实时定量）与GENEBANK里查到的cdna序列用PP5比较了一下，发现怎么好像不匹配？是不是我配的有问题？请大家帮我看看，谢谢！扩增产物有多长？CDNA:1 tggcgttgta tagttgggta cagcgaggct ggcgctgcgg tcagacgtgg gcgcctctct61 tgggtggcgg ctaccgggag ctctctgcga cccaggcccg gcag ...

Real time PCR文献大全 这是目录，内容包括以下几类ReviewsBasics and Theory of real-time PCRClinical applicationsReverse Trascriptase PCRNormalizationSYBR GreenLightUp probesTaqman probesOther probing techniquesSingle-cell PCRImmuno-PCRMicroarrayReal-time PCR ...

PCR产物的电泳检测时间　　一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带　　PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及，④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。　　模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq 敢种 剂，③模板中蛋白质?有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时，不出现 ...

聚合酶链反应的历史回顾聚合酶链反应相关技术的发展其它体外核酸扩增技术PCR技术的应用举例一、聚合酶链反应的历史回顾1、核酸体外扩增最早的设想　　由Khorana及其同事于1971年提出：“经过DNA变 性，与合适引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重视该过程便可克隆tRNA基 因”。但由于当时很难进行测序和合成寡核苷酸引物，且当时(1970年)Smith等发现了 DNA限制性内切酶，使体外克隆基因成为可能，所以，使Khora ...

我的基因的mRNA序列如下：1 atgaatggtg acacgcgggc cgcagtggtg acctcaccac ctccaaccac agcccctcac61 aaggagaggt actttgacag agtcgatgag aacaatccag aatatttgcg ggagaggaac121 atggcaccag accttcgtca ggacttcaat atgatggagc agaagaagag ggtgtctatg181 attctgcaga gtcccgc ...

1．我做的重复样品的标准曲线差别很大，这是什么原因？是不是CDNA样品不纯？答复：如果操作正确的话，重复样本是不应该差别很大的。做重复样本时，应当将所有的反应成分都先混合到同一反应管当中，然后再进行分装。这样可以最大限度地降低加样误差和样品混合不匀的问题。您可以尝试一下，如果还有问题的话，可以把结果文件直接MAIL给我们。以便我们可以更直观地了解问题。2．做realtime pcr的CDNA的浓度是多少？我看到有的文 ...

我最近用一在线的引物设计软件设计了一对SD大鼠caspase-3 的引物,不知行不,请高手多多帮忙.结果如下:Primer3 Output--------------------------------------------------------------------------------WARNING: Numbers in input sequence were deleted.No mispriming library specifiedUsing 1-based sequence positionsOLIGO start len tm g ...