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        我遇到的PCR问题

        丁香园论坛

        795
        :(我需要扩增一段长约700bp的启动子区域,做过梯度,但每次跑出来的条带很浅,而且会随着电泳时间的增加逐渐变淡,同时,引物二聚体一直很明亮。后来做了阴性对照,竟然也出现一样的条带。我们怀疑是受了污染,但也说和引物有关。:?):?):?)所以在此求教各位帮忙提点参考意见。
        1 gtgcagtggc tcaatctcgg ctcactgcaa gctccgcctc ccaggttcat gccattctcc
        61 tgcctcagcc tacatagtag ctgggactac aggtgcccgc caccacacct agctaatttt
        121 ttgtattttt agtagagacg gggtttcatc atgttagcca ggatggtctc gatctcctga
        181 cctcccaaag tggtgggatt acaggtgtga gccactgcgc ccggctggat gactcttgag
        241 acaacaccat tcagacaaag gcaaggcctc ccacttaaac tcataaccgt gtctcctttc
        301 tctccttcga tttgagcggc tgaatttggt tacagtcatc tgacctgtgg gtgtgaagtc
        361 cacctgcctg gcataaaaag ctgtgcctcc tttctaggtg aggagaaaga gagagacctg
        421 gctcatctga ggtgtggttg ggagggggga cccaggtgtg ctggaaatga aaagaaatgc
        481 attcctgttt ttcgtcccaa catgcaaaca actgaacaaa agcattaggg cctgagactg
        541 ggagtaaaga attccttgtc accatggata ccaggaaatg gccccactta tatataataa
        601 gggctttaga gatgctggac catctgatat tccagcctgg ggccacatgg gagtgtgccc
        661 tggtgttatt ccttatacag ttccatgaac atggctctgg aaacacctct gtctgcagaa
        721 aatgaggctt ttcttttttt gttcgggggt gaacagaggg cagaggcctg ggcatcttca
        781 ctcagcaccc ctttgtaacc cagcacttag caccatggct ggcgcacagc aatgtcacat
        841 gtgtgagtgc acacgatgcc tcactgccag gggtcacccc acaccggtgc tgttgggggc
        901 gttggagtgg ttatctcttc tttagtcctc aagctcctac ctggcagaga gctgcccaac
        961 accgtcgggg tggggtgggc gggaagggaa gaagcagcag caagaaagaa gccccctggc
        1021 cctcactctc cctccctgga cgccccctct tcgaccccat cacacagccg cttgaggctt
        1081 ggaggcagtg gatttccgag cctgggaacc ccggcgtctg tccggtgtcc ccgcagcctc
        1141 acccgtgctg gcccagcccc cgcgagttcg ggacccgggg tttccggggt ggcagggggt
        1201 tcccatgccg cctgcgaggc ctcggctcgg gccgctcccg gaacctgcac ttcaggggtc
        1261 ctggtccgcc gcccccagca ggagcaaaac aagagcacgc gcacctgccg gcccgcccgc
        1321 ccccttggtg ccggccaatc gcgcgctcgg ggcggggtcg ggcgcgctgg aaccagagcc
        1381 ggagccggat cccagccgga gcccaagcgc agcccgcacc ccgcgcagcg gctgagccgg
        1441 gagccagcgc agcctcggcc ccgcagctca agcctcgtcc ccgccgccgc cgccgccgcc
        1501 gccgccgccg cccccggggc atggcc
        tgtc tgatggccgc tttctcggtc ggcaccgcca
        1561 tggtgagtga gcgcatcctt cgtccgccgg gaacggtttt attttcaagg
        红色区域是我需要扩增的启动子区域,GC含量较高。
        我设计的引物是:
        上游:5'ccctcgagaacccagcacttagcaccatg3'
        下游:5'ccaagcttaccgagaaagcggccatcag3'
        能帮我看看么,小女子这厢在此先行谢过了~
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