DNA实验技术

吴彬彬 请问基因的结构性表达和功能性表达的具体定义分别是什么？？求解答，谢谢！zhujoker 不知道你的这种名称从何得来，为什么需要一个具体的定义？为什么非要追求一个死死的地定义，而不理解其具体作用hongyang8318 你说的基因结构性表达可能是你翻译错了，应该说是基因的组成性表达（constitutive gene 或者constitutively expressed）。具体定义指：一类在任何情况下不经诱导均在细胞中有所表达 ...

illusionsl 我准备做人的H19印记基因的甲基化检测，不知道哪位大侠听说过人的H19 DMR的多态性？我是希望能够利用其多态性，区分出父源或母源来源，提高检测效率和结果分析的准确性。我自己目前是没有查到相关文献。不胜感谢！我的QQ：602047slytjiaofei 看看这篇是否有用，链接如下：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16391843H19-DMR allele-specific m ...

寒凉 我最近要做E-cadherin DNA质粒转染HK-2细胞，想请教高手们在哪可以买到相关的质粒和使用何种转染试剂较好，谢谢！zhujoker 转染效率主要取决于你的细胞，转染试剂只是一个次要的方面，如果你的时间来得及，最好建议你使用慢病毒载体进行过表达，这样花的时间不是很多，效果肯定比转染好，至于质粒很多公司都有卖的。寒凉 谢谢您的指导本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以 ...

xuemei1984 新手求助定点突变，想要将原序列中转录因子的结合基序突变掉，有的文献是将核心区的碱基置换掉，而有的文献是将核心区的碱基删除，请问究竟是要选择删除还是置换呢？那种相对比较好一些？十分感谢！woxingwosu 感觉置换掉比较好，比较有说服力，文献上采用较多的还是将核心区的碱基置换掉。xuemei1984 woxingwosu wrote:感觉置换掉比较好，比较有说服力，文献上采用较多的还是将核心区的碱基置换掉 ...

qisanni05 请教各位大侠，为什么我在MiRbase上找不到hsa-mir-150 基因上下游序列呢，请各位高手帮忙找一下，十分感谢！qisanni05 这是什么意思啊，由于刚涉及这方面还不太懂，还请高手多指教，非常感谢！lide658 你是要找编码hsa-mir-150的序列吗？如果是想构建hsa-mir-150表达载体，在MiRbase上是找不到的，你只能找到hsa-mir-150的成熟序列或者是前体序列。但是你可以直接在 ...

xxzjcg 请教构建载体，插于片段670bp，pcDNA3.1质粒5400bp，如果10ul连接体系，插于片段加多少？pcDNA3.1加多少？woxingwosu pcDNA3.1：片段约为1：3至1：4，其他的成分按照要求来做。xxzjcg 可是我做了1：4加的，长出几个菌，但菌落PCR是阴性的，请教可能什么原因cixinkejian 确认下你的酶切位点；直接克隆虽然省事，但是还不如先走T载体克隆，然后再连接到你的目的载体上了！r ...

mcstudent 我打算找mir-155的靶基因，在网站上是这样的，求高人指导：在http://www.mirbase.org/网站上输入file:///C:/Documents%20and%20Settings/Administrator/Application%20Data/Tencent/Users/270756706/QQ/WinTemp/RichOle/XQ0~4MD6R67KP$7R%7B%60~7E.jpg这时候我是不 ...

xxzjcg 求助人的twist基因的全序列，谢谢slytjiaofei 按你的实际需要选择相应选项，结果见下面的链接！！！http://genome.ucsc.edu/cgi-bin/hgNear?hgsid=191200469&org=Human&db=hg19&near_search=uc003sum.2&near_order=expGnfAtlas2&near_count=50&near.do.getSeqPage=sequen ...

guotao123 在转基因生物中，是不是只要在启动子区检测到发生了甲基化，就可以导致表达沉默吗？还是得甲基化到一定的程度才导致表达沉默？slytjiaofei 这个不太好说，我想应该从以下两个方面考虑。第一，先看一下甲基化的程度怎样，网上有很多转录因子结合位点的预测软件，可以看看发生甲基化的部位是否在这些位点上或附近；第二，进行体外验证，可以利用甲基转移酶阴性的菌种构建含特定启动子序列的质粒载体，比较甲基化载体与非 ...

sin_007 如题。一个基因在肿瘤细胞中表达下调，而对癌细胞用5‘Aza去甲基化处理后表达更下调。这该怎么解释？本来还怀疑该基因受表观遗传调控呢，但是结果相反，不知该怎么办了。特集思广益。sunquanqiu 可以再看看Histon啊sin_007 sunquanqiu wrote:可以再看看Histon啊恩，正在考虑要不要再做做乙酰化。但是目前还没有相关文献报道，所以还没放手做。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的 ...

littleyan0418 我现在的任务是要构建人肺癌细胞的cDNA文库，但我不是这个方面科班出身，好多地方还不是很明白，想请教师兄师姐的经验，应该注意些什么。现在对总RNA的提取我有点找不出头绪。麻烦师兄师姐们可以给我分享些这方面的资料和网址吗？非常感谢！！neuronboy http://www.takara.com.cn/ 价格、试剂盒和说明书都有。呵呵littleyan0418 谢谢啊！！！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用 ...

云忆香香 最近分配到一个课题，但是刚开始学习，不知怎么做，请各位给点提示，谢谢！课题大致意思：已知一个质粒的目的基因序列，却不知道质粒序列，导师要求测出质粒的序列，有提示用染色体步移的方法。Ps：1，这个质粒很大，估计又20-30kb；2，目前市场上有测未知序列的试剂盒，但是最多测到3kb，我不知道用什么办法使其连续测下去；3，我的酶切位点都不知道；谢谢各位支持~zjubell 这么小的基因组，用高通量测序，很容易搞定的。20K ...

wymderek 本人目前在做肺癌基因检测，靶标方面的研究，手上的标本均为05---08年肺穿刺、气管镜的组织标本，既往曾经过福尔马林固定，石蜡包埋等处理，切片后行LCM（显微切割）选出肿瘤区域。小片组织细胞数约为50个细胞，我们的后续方法为从这样的标本组织中提取DNA（应用蛋白酶水解过夜，在蛋白酶失活方法，经过验证新近标本，均可成功），然后巢式PCR扩增，最后测序比对可能出现的突变或者缺失。我们检测的基因为EGFR及K ...

yin_xl 请教各位专家：对于终止密码突变，导致基因转录至下一个终止码才停止，这种突变引起的遗传性疾病，能否通过反义核苷酸特异性地结合在终止密码下游附近来强行终止翻译、以期产生正常的氨基酸序列？查了一下文献，没有看到资料。谢谢大家！zhujoker 这种技术在理论上现在是不行的，因为通过反义核苷酸会影响整个mRNA的稳定性，但是基因治疗是可以的yin_xl 谢谢！请问“用于基因治疗是可行的“这句话怎么去理解？是不是说通过载 ...

qiangshou2010 我想问个这几天一直想不明白的事情。现在人类基因组测序早就完成了，也开始了其它物种的测序，包括猴子---恒河猴，rhesus,这几天我查了猴子的几个基因，发现在它的序列里包括了一部分的N。这些N表示什么意思呢？是当时没有测出来？还是不能找到合适的样本，才测不出来的？在哪里可以查到序列完全测出来的物种呢？就拿猴子来说，哪种猴子的序列是测全了的呢？zhujoker N表示的意思就是Nucleosid ...

yaqingxinlan 请问哪位知道Axygen的DNA甲基化的纯化试剂盒在哪里能买到？怎么联系，非常感谢，急急急急急honglian198410 推荐你用ZMYO的甲基化试剂盒，我们用的这个比较好，只需要改良一下他的protocoltyssxlth 我用ZMYO的做不出来，用传统的方法做出来了。贺龙23 请问怎么修改ZYMO公司的甲基化硫化试剂盒的protocol？hugasis 不采用半小时进行亚硫酸盐进行修饰，你真O ...

kaoyanbaihe M13mp18的全基因图谱在哪里才能查到呢，我只查到了多克隆位点的序列，另外需要它的全基因图谱。大家帮帮忙啊baby_susan 你找的是这个网址吗http://www.fermentas.com/en/support/technical-reference/phage-plasmid-dna/m13mp18-m13mp19woxingwosu http://www.cardiff.ac.uk/biosi/st ...

张振中 众所周知，端粒DNA是细胞分裂的“计数器”，随着细胞分裂次数的增加，端粒逐渐缩短，细胞走向凋亡。而端粒酶具有修复端粒DNA，延长端粒DNA长度的作用。在众多恶性肿瘤细胞中，端粒酶呈现高表达。然而有新的研究表明，在过氧化应激的条件下，端粒酶从细胞核中迁移出来并进入线粒体。端粒酶必须在细胞核中才能发挥修复端粒DNA的作用，所以端粒酶必然存在着某些尚未知晓的“细胞核外功能”。进一步的研究发现，线粒体损伤是人体衰老的重 ...

linaque 本人没做过RNA干扰，想请教一个问题，可以在整体动物上沉默某个基因的表达吗？还是只能在细胞水平沉默某基因的表达？还是说在整体水平若要沉默某基因只能通过敲基因的方法？谢谢！路得自己走 基于过表达miRNA（当siRNA用了）的转基因小鼠敲减Prnp的实验，不知是否符合楼主所说的。linaque 谢谢！kinguangjun 个人观点：基因敲除一般是在胚胎细胞水平上筛选出来（也可以用多条透导型ShRNA表达系统整 ...

cindy18180 各位好，小女子第一次做细胞转染，有许多问题想请教，请大家多多指导:)首先，我要获得我的目的基因,在genebank上面查到mRNA全长3526bp，cds：713-2767我想问是不是我要的目的基因的有效片段是2054bp，适合用什么方法获得呢？用RT-PCR会不会太长了，扩不出来，或者效果不好？急用，请教各位前辈zjubell 你应该是想做过表达吧，那你的质粒上应该有启动子的吧，比如CMV。那你只需要 ...