• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        Alexa Fluor 488/Alexa Fluor 568(间接法)双重免疫荧光染色

        相关实验:光镜下双重免疫标记实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1. 古兹菲德-雅各氏病(CJD)病人的尸解脑组织,4% 中性甲醛固定,石蜡包埋,连续切片,厚 5 μm(贴片前的载玻片应预涂不含有荧光色素的黏合剂)。


        2. 常规脱蜡,水化。


        3. 抗原修复(柠槺酸盐缓冲液 pH 6.0 中,高压灭菌器加热 100℃,20 min)及 96% 甲酸孵育 2 min,PBS(pH 7.4,0.01mol/L)洗。


        4. 滴加一抗(抗 PrP McAb 12F10),1:300,室温,60 min。


        5. PBS 洗 5 min×2。


        6. 滴加荧光素标记的羊抗鼠 IgG(Alexa Fluor 488-GAM IgG)1:200,室温 30 min。


        7. PBS 洗 5 min×2。


        8. 正鼠血清封闭(1:10,室温 30 min),PBS 洗。


        9. 滴加配对一抗(SMI-31 McAb 1:2500;SMI-32 McAb 1:100;AP20McAb 1:250;SY-38McAb 1:10;抗-突触蛋白 1PcAb 1:25;M12.13 McAb1:25;抗-GFAPPcAb1:2000;CR3/43 McAb 1:50 及抗-泛素 PcAb 1:100 等),室温,60 min。


        10. PBS 洗 5 min×2。


        11. 滴加荧光素标记的羊抗鼠或羊抗兔 IgG(AlexaFluor568-GAM 或-GARIgG)1:200,室温 30 min。


        12. PBS 洗 5 min×2。


        13. 10% 缓冲甘油或明胶甘油封片。


        14. 荧光显微镜观察,显影(滤色片分别为 488 nm 及 568 nm)。结果:第一重抗原(PrPTSE)阳性产物呈亮绿色荧光,第二重配对抗原阳性产物呈橘红色。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序