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        HRP/AP 双酶双底物的双重免疫染色(间接法)——淋巴瘤轻链κ、λ的双重酶标记

        相关实验:光镜下双重免疫标记实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1. 石蜡切片常规脱蜡至水(若用含汞固定液固定的组织,则需用内含 0.5% 碘的乙醇溶液脱汞 5 min,乙醇浓度为 70%,经自来水洗后以 2.5% 硫代硫酸钠浸洗 1 min,水洗)。


        2. 0.3%H2O2 甲醇液浸泡切片 30 min,自来水洗,蒸馏水洗,入 PBS(0.01mol/L,pH 7.2)洗。


        3. 滴加正常羊血清 1:10,湿盒,室温,10 min,不洗。


        4. 加一抗(抗人κPcAb 与抗人 McAb 的混合液)1:200,湿盒,37℃,45 min 或更长。


        5. PBS 洗 5 min×3。


        6. 加二抗(GARG+GAMG 混合液 1:200),湿盒,37℃,30 min。


        7. PBS 洗 5 min×3。


        8. 加酶-抗酶抗体复合物(兔 PAP+鼠 PAP-AP 混合液 1:100)湿盒 37℃,30 min。


        9. PBS 洗 5 min×3。


        10. 过氧化物酶显色反应:以 DAB/H2O2 液显色 7~10 min(镜下控制显色程度),PBS 洗 5 min×3。


        11. 碱性磷酸酶显色反应:以萘酚 AS-MX/坚固蓝(fast blue)显色 10~15 min(镜下控制显色程度),PBS 洗,自来水洗。


        12. 缓冲甘油封片,光镜下观察。

        注意事项

        若为同种动物抗血清,可分别进行标记染色,其间应经多聚甲醛蒸气处理 4 h 或用 pH 2.2 的甘氨酸-盐酸缓冲液处理 2 h,以避免彼此的交叉反应。

        来源:丁香实验

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