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        斑点杂交法

        相关实验:痘苗 DNA 检测实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1. 病毒感染细胞并完成筛选(见「PCR 法」步骤 1~9)。


        2. 轻轻刮下细胞,转移到离心管中,最大转速离心 30 s,弃培养基,用 200 μl PBS 重悬。24 孔培养板中的细胞也可用 1ml 的注射器的活塞刮取。


        3. 冻融并超声细胞悬液(见「PCR 法」步骤 11、12)。


        4. 将硝酸纤维素膜剪至适合点迹仪大小,将其用水浸湿,放入仪器中,每孔中加入 20~100 μl 的细胞悬液(步骤 3),用抽吸的方法使液体流过硝酸纤维素膜,随后将膜取出。


        5. 剪 6 片 Whatman 3 MM 滤纸,使其稍大于硝酸纤维素膜,将一块 Whatman 3 MM 滤纸用 0.5 mol/L NaOH 浸湿。把硝酸纤维素膜放在湿润的滤纸上 1 min。移开硝酸纤维素膜,将其放在干燥的滤纸上 1 min。用同样的滤纸重复此步骤 2 次。使用镊子移开硝酸纤维素膜。


        6. 用浸润过 1 mol/L Tris • Cl pH 7.5 溶液的滤纸按步骤 5 的方法处理硝酸纤维素膜 (每张膜 3 次)。


        7. 用浸润过 2 × SSC 溶液的滤纸按步骤 5 的方法处理硝酸纤维素膜(每张膜 3 次)。


        8. 用 80℃ 真空干燥箱烘烤硝酸纤维素膜 2 h。


        9. 进行 DNA 杂交。

        注意事项

        1. 所有培养都在加湿的 37℃ 5% CO2 培养箱中培养,除非有特殊说明。


        2. 与活细胞接触的器械和试剂都应该是无菌的,操作也必须无菌。

        来源:丁香实验

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        2022-04-27

        关于核酸斑点显色,我的膜有点小就只有undefined5

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        2022-04-13

        核酸斑点杂交杂交真空干燥的,压力有要求吗,为什么我的东西都固定不上

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        2022-05-01

        核酸斑点杂交,只有中间一列显色很深,是说明其他的探针灵敏度不行吗还是显色剂用量不够。

        1 回答 355 围观
        2022-05-06

        核酸斑点杂交,倒掉预杂交液后,加入杂交液是只要加进去就行还是要点在点样那一面上

        2 回答 316 围观
        2022-04-29

        杂交显色的问题,我还有好多问题🙊

        1 回答 314 围观
        2022-04-13
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