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        组织切片的免疫荧光标记

        相关实验:​ 免疫组织化学法实验

        最新修订时间:

        原理


        材料与仪器

        步骤

        1) 将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒。从冰冻切片机或冰箱取出载有切片的载玻片,交叉放入玻片盒(每边约6片)或加湿盒中。勿使载玻片相互接触。


        2) 待载玻片达到室温且未干时,于切片上铺加PBS,勿使溢出玻片。


        3) 稀释的第一抗体于4℃用微量离心机以13500 g离心2 min (每一载玻片上加40〜 50μL抗体,应能盖住切片)。


        4) 用与泵相连的巴斯德吸管,在切片的一端吸去玻片上的PBS,并从另一端加上抗体,盖上加湿盒,室温温育1 h。


        5) 以PBS洗玻片3次(5 min/次)。


        从切片一端加入新的PBS缓冲液,由另一端吸去旧的缓冲液。


        6) 稀释的第二抗体于4℃用微量离心机以13500 g离心2 min。以每载玻片40〜50μL抗体计。


        7) 将第二抗体加于切片上,置加湿盒中室温温育1 h。以PBS洗玻片3次(5 min/次)。


        8) 将盖玻片放于纸巾上,滴加1滴Gelvatol于盖玻片中央。翻转载玻片放于盖玻片上,勿施压。将玻片置工作台上,用铝箔覆盖避光放置30 min,使Gelvatol凝结。


        9) 显微镜下观察结果,或置玻片盒中储于4℃。

        来源:丁香实验

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