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        单层生长细胞的免疫荧光标记

        相关实验:​ 免疫组织化学法实验

        最新修订时间:

        原理



        材料与仪器

        步骤

        1) 细胞置于冰上冷却,吸去培养液并以4℃的PBS洗涤,吸去PBS。


        2) 如欲研究细胞表面抗原,则以2% PFA于冰上固定30 min。如研究细胞质抗原,则 可用含0.1% Triton×-100的2% PFA于冰上固定30 min,或以100%甲醇在普通冰箱的结冻室(-10〜-20℃)固定15 min。


        两种固定细胞质抗原的方法均可获满意结果。然而,用高聚甲醛/Triton×-100固定通常可获更佳 的形态学观察结果,如采用甲醇固定法,应确保细胞在放入冰箱以前,先用甲醇充分予以洗涤,否则细胞会冻结。使用与泵连接的巴斯德吸管抽吸液体。


        3) 吸去固定液,用4℃的PBS洗2次(5 min/次)。稀释的第一抗体于4℃用微量离心机以13 500 g离心2 min。


        4) 加第一抗体于培养皿中,使其恰好覆盖细胞,4℃温育1 h。然后用4℃的PBS洗4次 (5 min/次)。


        5) 稀释的第二抗体在4℃用微量离心机以13500 g离心2 min。


        6) 加入第二抗体,4℃温育1 h。然后用4℃的PBS洗4次。


        7) 若不想立即观察细胞,则将细胞于PBS中存放。盖好培养皿,以铝箔包裹,冷藏。 在24 h内观察此实验结果是很重要的,因荧光会迅速减弱或与细胞解离。


        如用LabTek细胞培养玻片,可取玻片以Gelvatol进行封片处理。

        来源:丁香实验

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