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        ​ 免疫组织化学法实验

        实验分类:

        免疫学实验

        最新修订时间:

        简介

        进行蛋白质定位的免疫组织化学技术。来源:《精编分子生物学实验指南》第五版

        来源:丁香实验

        操作方法

        单层生长细胞的免疫荧光标记

        1) 细胞置于冰上冷却,吸去培养液并以4℃的PBS洗涤,吸去PBS。2) 如欲研究细胞表面抗原,则以2% PFA于冰上固定30 min。如研究细胞质抗原,则 可用含0.1% Triton×-100的2% PFA于冰上固定30 min,或以100%甲醇在普通冰箱的结冻室(-10〜-20℃)固定15 min。两种固定细胞质抗原的方法均可获满意结果。然而,用高聚甲醛/Triton×-100固定通常可获更

        悬浮细胞的免疫荧光标记

        1) 细胞在冰浴中冷却,然后用台式离心机在4℃以800 g离心5 min (用于淋巴细胞)。吸去培养液并以4℃的PBS重悬细胞。离心机转速依细胞类型进行调整,但必须低转速离心,以防止损伤细胞。除非特别说明,否则所有离心步骤均在此条件下进行。2) 离心,吸去PBS,以1〜2 mL 2% PFA固定液,或2% PFA固定液/0. 1% Triton ×- 100重悬细胞,置冰上固定30 min。3)

        组织切片的免疫荧光标记

        1) 将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒。从冰冻切片机或冰箱取出载有切片的载玻片,交叉放入玻片盒(每边约6片)或加湿盒中。勿使载玻片相互接触。2) 待载玻片达到室温且未干时,于切片上铺加PBS,勿使溢出玻片。3) 稀释的第一抗体于4℃用微量离心机以13500 g离心2 min (每一载玻片上加40〜 50μL抗体,应能盖住切片)。4) 用与泵相连的巴斯德吸管,在切片的一端吸去玻片上的PBS,并从另

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