材料与仪器
步骤
实验材料、试剂、仪器参见基本方案。
1. 制备细胞并进行渗透化处理和标记(见基本方案步骤 1~6)。
2.1 贴壁细胞培养。快速吸掉有渗透性的缓冲液,每孔中加入 100~250 μl 4℃ 预冷的双向-PAGE 裂解缓冲液,停止反应。每板使用不同的细胞刮片刮离细胞于缓冲液中,将细胞样品转移到新的旋盖离心管中。
2.2 悬浮细胞培养。室温,最大速度离心 1 min,迅速吸出并弃去上清。小心操作,切勿搅散细胞团块。加入100~250 μl 2 × SDS-PAGE 样品缓冲液到每管中,涡旋, 充分混匀。
3. 如果因 DNA 的影响样品很黏稠,可将拧紧管盖的样品管放入浴式超声仪中,冰浴, 超声作用 5 min。在干冰/乙醇浴中冷冻样品,然后在冻干机上冻干。
4. 将冻干样品重溶于 50~100 ml 的双向-PAGE 样品缓冲液中。加热样品至 37℃, 3~5 min,将10~20 μl 的样品加到制备好的等电聚焦电泳胶上。
注意事项
来源:丁香实验



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