• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        备择方案2 制备用于等电聚焦的天然细胞样品

        相关实验:渗透细胞蛋白磷酸化实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        实验材料、试剂、仪器参见基本方案。


        1. 制备细胞并进行渗透化处理和标记(见基本方案步骤 1~6)。


        2.1 贴壁细胞培养。快速吸掉有渗透性的缓冲液,每孔中加入 100~250 μl 4℃ 预冷的双向-PAGE 裂解缓冲液,停止反应。每板使用不同的细胞刮片刮离细胞于缓冲液中,将细胞样品转移到新的旋盖离心管中。


        2.2 悬浮细胞培养。室温,最大速度离心 1 min,迅速吸出并弃去上清。小心操作,切勿搅散细胞团块。加入100~250 μl 2 × SDS-PAGE 样品缓冲液到每管中,涡旋, 充分混匀。


        3. 如果因 DNA 的影响样品很黏稠,可将拧紧管盖的样品管放入浴式超声仪中,冰浴, 超声作用 5 min。在干冰/乙醇浴中冷冻样品,然后在冻干机上冻干。


        4. 将冻干样品重溶于 50~100 ml 的双向-PAGE 样品缓冲液中。加热样品至 37℃, 3~5 min,将10~20 μl 的样品加到制备好的等电聚焦电泳胶上。

        注意事项

        在步骤 2 中精确把握离心时间非常重要,否则,将会影响实验的重复性。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序