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        备择方案1 制备用于SDS-PAGE的天然细胞样品

        相关实验:渗透细胞蛋白磷酸化实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        实验材料、试剂、仪器参见基本方案。


        1. 制备细胞并进行渗透性处理和标记(见基本方案步骤 1~8)。


        2.1 贴壁细胞培养。快速吸尽有渗透性的缓冲液,在每板中加入 100~250 ℃ 预冷的 2 × SDS-PAGE 样品缓冲液,停止反应。每板使用不同的细胞刮片迅速刮离细胞于缓冲液中,转移细胞样品至新的旋盖离心管中。


        2.2 悬浮细胞培养。在微量离心反应管中以最大速度离心 1 min, 室温。迅速吸尽上清,小心操作,切勿搅散细胞团块。每管中加入 100~250 μl 2 × SDS-PAGE 样品缓冲液,涡旋,充分混匀。


        3. 如果因 DNA 从核释放使样品很黏稠,可将拧紧管盖的样品管放入浴式超声仪中,冰浴,超声作用 5 min。


        4. 将样品管放入沸水浴 3 min , 按每孔 50 将样品加入 SDS-PAGE 电泳胶中,电泳。

        注意事项

        步骤 2 中精确把握离心时间非常重要,否则将会影响实验的重复性。

        来源:丁香实验

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