ExoPura® Basic外泌体纯化柱试剂盒（1T）

试用联系时间：会在收到申请信息后 1-2 周内安排联系，试用发放时间会结合您的实验情况安排，欢迎大家来申请~

★产品名称：ExoPura® Basic 外泌体纯化柱试剂盒

★产品用途：采用尺寸排阻技术，适用于澄清度高的非复杂生物样本（如细胞上清、牛奶澄清 液等）中外泌体囊泡的分离和纯化，可重复使用。

★产品描述：

ExoPura^® Basic是上海宇玫博生物科技有限公司开发的高效外泌体纯化试剂盒，适用于澄清度高的非复杂生物样本（如细胞上清、牛奶澄清液等）中外泌体囊泡的分离和纯化。ExoPura^® Basic柱采用尺寸排阻技术，根据颗粒的大小在颗粒通过装有多孔多糖树脂的柱子时对其进行分离。当样品在重力作用下通过ExoPura^® Basic柱时，大颗粒首先流出，小颗粒则在下行过程中进入树脂孔，延迟流出。ExoPura^® Basic柱体积由固体树脂（固定相）和液体缓冲液（流动相）占据。颗粒不与树脂发生化学结合，保证分离稳定性和可重复性。该试剂盒具有快速、高效、获得的外泌体纯度高等特点，可用于电镜分析、NTA粒径分析、核酸分析、蛋白分析、细胞学实验和动物实验等。

特别注明：本试剂盒仅为外泌体纯化试剂盒，非浓缩试剂盒，需购买Umibio外泌体提取试剂盒或采用其他方式对样本进行浓缩前处理。

★产品组成：

★产品优势：

适合外泌体纯化，大幅度提高纯度；

可以重复使用，多达五次稳定输出；

无需超速离心，外泌体活性更好；

附赠大礼包，操作更方便；

快速提取，30分钟搞定！

★质控数据：

★详细实验操作步骤

一、 样品准备

单次上样体积：0.5 mL ，上样前平衡至室温。  

浓缩：可使用 Umibio 外泌体提取纯化试剂盒（细胞 上清）【货号 UR52121】、Umibio 外泌体提取试剂 盒（乳液）【货号 UR52146】对样品进行 100 倍以上 浓缩 ，或采用超离、切向流、100 kD 超滤等方式，进 行 50 倍以上浓缩。

注：谨慎使用超离，可能导致蛋白聚团影响分辨率。

推荐 BCA 浓度：含 10% 去外泌体血清的细胞上清粗提 外泌体 BCA 浓度大于 3  μg/μL ，无血清细胞上清粗提 外泌体 BCA 浓度大于 1  μg/μL，乳液粗提外泌体 BCA 浓度大于 3  μg/μL。

注：ExoPura®   Basic 柱的主要作用为去除蛋白和游离  核酸等小颗粒物质，纯化过程会对样本进行一定的稀释， 因此应尽量保证样品中有足够多的囊泡。如需拍摄电镜， 原样颗粒数浓度建议大于 8.0E+10 particles/mL。

二、 样品预处理

1、 使用推荐方法浓缩样品。

2、 过滤：使用 0.22  μm 滤膜去除粗提外泌体中的大颗粒。 注：使用 Umibio 外泌体提取纯化试剂盒（细胞上清） 【货号 UR52121】、Umibio 外泌体提取试剂盒（乳  液）【货号 UR52146】提取，经 EPF 柱纯化后的样品  无需再使用 0.22  μm 滤膜过滤。

3、 准备 PBS：使用新过滤的 PBS（0.22 μm）以避免污染    和引入大颗粒，确保 PBS 的温度与柱子相同（18~25˚C）。 

注：尽量使用当天新配的经过 0.22  μm 滤膜过滤的    PBS，或采购已过膜的 PBS，避免引入微生物及颗粒物    污染。如果使用 4°C 冰箱保存的 PBS 溶液，必须平衡    到室温后再用，否则有可能在柱子中引入大量气泡，影

响分离效果。

三、 柱平衡与柱清洗

1、 实验前确保 ExoPura®   Basic 柱处于 18~25˚C 的操作  温度范围内，在达到操作温度范围之前，请勿取下柱盖。

2、 先取下顶盖上黑色橡胶帽，平衡气压后，再取下顶盖。

3、 将 ExoPura®  Basic 柱垂直安装到铁架台上，将废液收 集管（离心管或者烧杯均可）放置于柱下方，以备使用。

4、 弃去筛板上方的填料保存液（取下底盖，待填料保存液 自然流尽或用移液器吸去）。

5、 填料保存液流尽后，使用 PBS 对 ExoPura®  Basic 柱的 上室进行 2~3 次洗涤，随后加入 20 mL PBS 清洗柱内 填料（可分次加，也可连接适配器，每毫升 PBS 流穿 时间约 1.5~2.5 min）。当所有 PBS 都进入柱内，液 体将停止流出。

注：适配器的使用方式：绿色适配器上方连接 20  mL 规格注射器针筒。

6、 PBS 流尽后直接上样，或加入 2 mL PBS 盖上底盖备用。 

注：若使用适配器，待针筒中 PBS 流尽，柱内剩余约  2~3 mL  缓冲液，可取下适配器，等待剩余 PBS 流尽，  随即进行上样或加入 2 mL PBS 盖上底盖备用。

四、 外泌体收集

1、 上样前准备：

使用推荐方法浓缩并过滤样本 ，准备若干标注好的 1.5 mL EP 管待用。

2、 加入 0.5 mL 样品：一旦 PBS 不再流出，立即将室温平 衡好的 0.5 mL 样品加至 ExoPura®  Basic 柱筛板上（若 样品不足 0.5 mL，用 PBS 补足）。

注：避免在过程中长时间停止柱流，确保囊泡分离效果。

3、 流穿 2.87 mL 缓冲液*（空隙体积）：当所有样品都进  入筛板，底部出口无液体流出后，加入 2.37 mL PBS ，  等待 PBS 流过直至无液体流出。此过程中，共流出缓  冲液体积 2.87 mL（0.5 mL 样品体积+2.37 mL 缓冲液）

*该体积缓冲液是可丢弃的洗脱液，在含有高比例纯化外泌体溶液 流出之前。

注：为准确确定流穿体积，仅加入固定体积溶液，等待 其流过直至流动停止。

4、 收集外泌体馏分：立即用新的 EP 管准备收集纯化体积， 分次在筛板上方加入 0.5 mL PBS，按 0.5 mL/馏分收  集 2~3 个馏分（纯度最佳为前 2 个馏分即 1 mL 体积 ， 推荐合并前 3 个馏分即 1.5 mL 体积） ，每次等待体积  流过直至流动停止。

5、 过滤外泌体 ：将 收集的外泌体馏分 转入  Exosome Purification Filter（ EPF 柱）上室中，于 4℃以 3,000 ×g（~6,200 rpm*）离心 10 min，离心后收集 EPF 柱管底的液体，此液体即为过滤的外泌体（注：EPF 柱 不可重复使用）。

*为约7cm有效离心半径的小离心机换算(≤2mL离心管）。

6、 测定收集产物的颗粒浓度和蛋白浓度。如需要， 可使用

100 kD 超滤管对收集产物进行进一步浓缩富集（选做）。

五、 柱再生和储存

1、 柱再生：收集到所需体积后，用 10 mL 再生液进行清 洗，再用 20 mL PBS 清洗，随后可进行第二次上样。

2、 柱储存：如果要储存以备将来使用，先用 10 mL  再生液进行清洗，再依次用 20 mL PBS、20 mL 去离子水 和 20 mL 的 20%乙醇清洗，清洗结束后盖上底盖，倒 入保存液（ 20%乙醇），盖上顶盖密封储存。

注：再生液为碱性，避免再生液清洗后直接添加去离子 水或 20%乙醇来平衡纯化柱，防止树脂床内的盐沉淀 并损坏柱。

去离子水清洗可进一步洗去平衡过程中产生的盐， 防止盐与 20%乙醇直接接触产生结晶。

可按每毫升液体流穿需 1.5~2.5 min 估算各步骤  清洗时间，避免柱内液体流尽后，填料干放时间过长。