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        依赖环核苷酸的蛋白质激酶

        相关实验:用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1. 在置于冰上的离心管内配制含下列成分的 20 μl 反应混合物:

        5X 激酶分析缓冲液 4 μl,10 mg/ml 组蛋白 2B 储存液 1 μl,[γ-32P] ATP(终浓度为 5 μCi/5 μmol/L ATP) 1 μl,水(取决于下一步所加的激酶样品的量) 0~14 μl

        10X 环核苷酸依赖的蛋白质激酶分析缓冲液

        20X 环核苷酸储存液

        2. 往上述反应混合物中加 1~14 μl 激酶样品,开始反应。

        3. 于 30℃ 反应一定时间(先做预实验,从 10 分钟时起,最好选线性反应期的某个时间点)。

        4. 制备样品进行 TCA 沉淀分析、SDS-PAGE 或者用 P81 磷酸纤维素滤纸分离标记的组蛋白。

        来源:丁香实验

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