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        JAM分析

        相关实验:DNA 裂解分析实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1. 实验前一天,将细胞接种于新鲜培养基。对数生长期细胞可更好地渗入 [3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷。

        2. 收获细胞,在新鲜培养基中以 1X106 细胞/ml 重悬,用 5 μCi/ml [3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷标记 2~4 小时。或者,用 1 μCi/ml [3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷过夜标记较低密度的细胞。

        3. 用 HBSS,PBS 或培养基将细胞洗 2 次,在培养基中重悬 0.2X106~1X106 细胞/ml 在开始前确定细胞已被标记。

        4. 接种细胞于 96 孔平底组织培养板,用推定的凋亡诱导物孵育 5~18 小时。

        5. 加 EDTA 至终浓度为 5 mmol/L,用合适的 96 孔板细胞收获仪将细胞收获至玻璃纤维滤器。

        6. 在 80℃ 烘箱中 10 分钟或微波 4 分钟干燥滤器。

        7. 在塑料袋中密封滤器,加入可生物降解的闪烁液至滤器完全浸润,用 β 计数仪测定放射活性。

        8. 按下式计算 DNA 片段含量:

        DNA 片段(%)=100%X [1-(试验值/对照值)]

        来源:丁香实验

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