• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        收藏
        wx-share
        分享

        DNA 裂解分析实验

        实验分类:

        细胞实验

        最新修订时间:

        简介

        本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。

        来源:丁香实验

        操作方法

        琼脂糖凝胶电泳

        1. 将 5X105 细胞移入无菌的 1.5 ml Eppendorf 管中,4℃ 2000 r/min 离心 5 分钟,弃上清。 2. 加入 20 μl 溶解缓冲液。用移液管尖头混匀细胞沉淀。 3. 加 10 μl RNA 酶A/T1 混合液,轻弹管尖混匀,不要形成旋涡。37℃ 孵育 30~120 分钟。 4. 加 10 μl 蛋白酶 K,轻弹管尖混匀,50℃ 孵育至少 90 min,也可

        个体核的PI荧光

        1. 在 96 孔圆底组织培养板中加入 100 μl 悬浮细胞,200 g 离心 5 分钟。 2. 吸出上清,用 250 μl 低渗荧光染料溶液溶解沉淀细胞,用移液管辅助混匀细胞。 3. 样品移至 FACS 微管,旋转搅拌,冰上避光孵育至少 30 分钟,用流式细胞计量仪读取 PI 荧光。测得凋亡细胞核百分率结果。

        乙醇固定后PI染色

        1. 在 5 mmol/L EDTA-PBS 中洗 1X106 细胞,重悬于 300 μl 洗涤缓冲液中。加 700 μl 100% 的冰冷乙醇,滴加,并轻微搅拌。旋转搅拌混匀。 2. 14000 g 短时离心沉淀细胞。吸出上清,在 500 μl 洗涤缓冲液中重悬细胞。加 50 μl RNA 酶在室温下孵育 30 分钟酶切 RNA。 3. 加入 500 μl PI 溶液,旋转搅拌,按上述方法进

        JAM分析

        1. 实验前一天,将细胞接种于新鲜培养基。对数生长期细胞可更好地渗入 [3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷。 2. 收获细胞,在新鲜培养基中以 1X106 细胞/ml 重悬,用 5 μCi/ml [3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷标记 2~4 小时。或者,用 1 μCi/ml [3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷过夜标记较低密度的细胞。 3. 用 HBSS,PBS 或培养基将细胞洗 2 次,在培养基中重悬 0.2X106

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序