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        选择性剥离法进行有丝分裂期同步

        相关实验:细胞同步化实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1. 往 175 cm2 规格的培养瓶中接种细胞,培养至汇合率达 60%~80%。

        2. 用力敲打培养瓶 10 次,然后吸去培养液,以去除松散贴壁的细胞,死细胞和细胞碎片。

        3. 加入 10 ml 含 0.05 mg/ml 诺考达唑的预温培养基,重新放回温箱孵育 4 小时。

        4. 将培养瓶中的培养液转入无菌试管中。

        5. 中等用力拍击培养瓶以剥离有丝分裂细胞,用 5 ml 原来的含诺考达唑培养液涮洗瓶子两次,再转入一支新的试管中。收集到的有丝分裂的细胞能室温放置,然后处理其余的培养瓶。每只瓶子的细胞产量为 3X105~4X106

        6. 合并所有瓶中的有丝分裂细胞,分析有丝分裂细胞的百分比。

        7. 要得到 G1 期细胞,600 g,37℃ 离心 8 分钟,用不含诺考达唑的培养基于 37℃ 重悬细胞,每 175 cm2 规格培养瓶接种 1X107 细胞,培养 3~4 细胞,收获。

        来源:丁香实验

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