细胞同步化实验

1. 用完全培养基培养 CHO 细胞，这样当细胞转入无异亮氨酸培养基培养时，细胞汇合率达 50%~60% 且处于对数生长期。 2. 吸弃培养基，用预温的无异亮氨酸的培养基冲涮一次细胞，加入无异亮氨酸的培养基，37℃ 孵育 40~48 小时。 3. 要重新释放细胞的话，就撤换培养基，用含异亮氨酸的预温 DMEM 培养基洗涮细胞两次，之后加入完全培养基。

一、双胸苷同步化法 1. 往指数生长期细胞培养物中加入 2 mmol/L 的胸苷，孵育 12 小时。 2. 600 g 离心，去含胸苷培养基，换上正常培养基轻轻重悬细胞，让细胞生长 10~12 小时使完全走出 S 期。 3. 加入胸苷至 2 mmol/L，孵育 12~14 小时。 4. 600 g 离心，去含胸苷培养基，换上正常培养基释放同步化细胞。 5. 取样，用流式细胞计量仪监测细胞

1. 往 175 cm2 规格的培养瓶中接种细胞，培养至汇合率达 60%~80%。 2. 用力敲打培养瓶 10 次，然后吸去培养液，以去除松散贴壁的细胞，死细胞和细胞碎片。 3. 加入 10 ml 含 0.05 mg/ml 诺考达唑的预温培养基，重新放回温箱孵育 4 小时。 4. 将培养瓶中的培养液转入无菌试管中。 5. 中等用力拍击培养瓶以剥离有丝分裂细胞，用 5 ml 原来的含诺考达唑

1. 准备下列仪器： 洗脱离心机 装有一个大容器中的 20 L 培养基，含 0.5%~1% 血清和抗生素，置于室温 20 个 1 L 的锥形瓶，用以收集各洗脱组分 2. 至少提前 10 天开始培养细胞，进行离心洗脱时细胞连续进入指数生长期且不会达到太大的饱和度。 3. 按洗脱仪提供的说明，安装转头和离心机，加入去离心水启动整个系统。 4. 细胞装在 1 L 的瓶子中，600 g，离心