离心洗脱法

1. 准备下列仪器：

洗脱离心机

装有一个大容器中的 20 L 培养基，含 0.5%~1% 血清和抗生素，置于室温

20 个 1 L 的锥形瓶，用以收集各洗脱组分

2. 至少提前 10 天开始培养细胞，进行离心洗脱时细胞连续进入指数生长期且不会达到太大的饱和度。

3. 按洗脱仪提供的说明，安装转头和离心机，加入去离心水启动整个系统。

4. 细胞装在 1 L 的瓶子中，600 g，离心 25 分钟。

5. 倒尽上清，合并所有的细胞沉淀至一支 50 ml 规格的管中，终体积 40~50 ml。

6. 将上述浓缩的细胞悬液通过一支装有 18# 针头的注射器，打散细胞团块。

7. 显微镜检查细胞，如果有必要，用更小的针头重复处理直至大于 95% 的是单细胞。

8. 往洗脱系统中泵入含 0.5%~1% FCS 的培养基。

9. 参考洗脱仪附带的说明进行适当的细胞注入操作。

10. 首先分离个体小的 G1 期细胞，慢慢提高流速。

11. 当细胞室内看起来似乎没有什么细胞时，停止转头，维持流速，洗脱出残余的细胞。

12. 一边洗脱，一边用 Channelyzer 计数细胞和测量细胞大小。洗脱完毕，有必要分析各组细胞所位于的细胞周期的哪一阶段。