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        备选方案3

        相关实验:融合蛋白的酶解实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1.  做预试验监测肠激酶与融合蛋白按不同比例混合后的裂解效率,准备5个反应体系:
         
        (1)反应1至4:20 μl 融合蛋白;0.2 U、0.5 U、1 U和2 U的rEK,加50 mmol/l Tris·Cl(pH8.0)/1 mmol/l CaCl2至总体积30 μl。

        (2)反应 5:20 μl 1 mg/ml 融合蛋白,10 μl 50 mmol/l Tris·Cl(pH8.0)/1 mmol/l CaCl2(模拟消化)。

        (3)样品于37℃温育16 h。
         
        2.  在每个样品中加入30 μl 2×SDS样品缓冲液以终止反应,煮沸10 min。
         
        3.  每个样品取10 μl 加样于SDS-聚丙烯酰胺凝胶上分析它们的裂解程度。调整肠激酶浓度和温育时间以得完全消化。

        4.  按比例扩大反应,消化更大量的融合蛋白。

        来源:丁香实验

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