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        基本方案

        相关实验:融合蛋白的酶解实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1.  准备两个小量预试验反应以确定最佳温育时间:
         
        (1)反应1:20 μl 含有1 μl 200 μg/ml Xa因子的1 mg/ml 融合蛋白,室温下反应

        (2)反应2:5 μl 不含因子Xa的1 mg/ml 融合蛋白(模拟消化),室温下反应。
         
        2.  分别在2、4、8和24 h取出5 μl 反应液,加2×SDS样品缓冲液5 μl,-20℃下冻存。

        3.  在24 h 时,将5 μl 反应2(模拟消化)液与5 μl 2×SDS样品缓冲液混合。

        4.  将5 μl 原始融合蛋白溶液与5 μl 2×SDS样品缓冲液混合。
         
        5.  将所有样品于沸水浴中加热10 min,加样到SDS-聚丙烯酰胺凝胶上电泳,根据裂解程度确定适当的温育时间。
         
        6.  确定了适当的裂解条件后,将余下的融合蛋白样本按比例扩大反应,仅留小量的未裂解融合蛋白作对照用。以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳监测裂解程度。

        来源:丁香实验

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