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        备选方案1

        相关实验:融合蛋白的酶解实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1.  准备两个小量预试验以确定最佳裂解反应条件:
         
        (1)反应1:20 μl 1 mg/ml 融合蛋白溶液(在合适的缓冲液中)及0.2 μg 凝血酶。

        (2)反应2:5 μl 1 mg/ml 融合蛋白溶液(模拟消化),25℃下温育反应。
         
        2.  在30 min、1 h、2 h 和4 h 等时刻从反应1中分别取出5 μl 反应液与5 μl 2×SDS样品缓冲液混匀,-20℃冷冻。

        3.  在4 h,往反应2(摸拟消化)中加入5 μl 2×SDS样品缓冲液。
         
        4.  将5 μl 原始的融合蛋白溶液与5 μl 2×SDS样品缓冲液混匀。

        5.  将所有样品煮沸10 min,加样于SDS-聚丙烯酰氨凝胶上分析样品的稳定性以及裂解的效率。
         
        6.  采用试验所得的最佳融合蛋白裂解条件,按比例任意扩大蛋白裂解反应。

        来源:丁香实验

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