• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        基本方案

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1.  表面标记或生物合成标记的细胞在裂解缓冲液中于4℃放置1 h 后,再于4℃3 000 g 离心10 min 除去细胞核,然后将所得上清在10000 g 离心1 min。
         
        2.  一次性对上清进行预处理,每200 μl 上清加入10 μl 活化后被淬灭的琼脂糖对照。在旋转揺床中室温揺荡2 h 或在4℃过夜。200 g 离心1 min,保留上清。
         
        3.  在1.5 ml 的微量离心管中加满裂解液室温作用10 min,对其进行预包被。吸去液体后,加入105~106 cpm 的含抗原的放射性标记上清,加稀释缓冲液使终体积为200 μl。
         
        4.  加入10 μl 1:1的抗体-Sepharose偶联物胶浆/稀释缓冲液。4℃在旋转摇床中摇荡1. 5~3 h,一直保持Sepharose呈混悬状。

        5.  Sepharose偶联物依次用1 ml 下面列出的缓冲液洗涤。毎次洗完后,200 g 离心5 min 或微量离心5 s。以细头的巴斯德吸管小心吸去上清,仅在沉淀的上面留10 μl 的液体。在第4次洗涤后,离心甩下管壁所有残余液滴并将其吸去,沉淀上仅留下约 10 μl。
         
        6.   加入20~50 μl SDS样品缓冲液。由于样品缓冲液比重大于洗涤缓冲液,它可渗透到Sepharose中,不要用旋涡混合器旋起SEpharose,以免使之粘附在缓冲液液面以上的管壁。盖紧盖子,于100℃保温5 min。

        7.  用旋涡混合器混匀,200 g 离心或微量离心5 s。将上清加样于凝胶以SDS-PAGE分析,使用增感屏进行放射自显影或荧光自显影或检测标记蛋白质。

        常见问题

        基本方案
        图一、用于分离蛋白质的抗原的免疫沉淀
         

        来源:丁香实验

        ad image
        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序