免疫沉淀放射性标记抗原
最新修订时间：
材料与仪器
步骤
1. 按基本方案进行，但以下说明的操作步骤已经修改：
（2b）按所需选用步骤4b所提供的其中之一备择物（①，②，③）预澄清放射性抗原溶液。
（4b）加入1 μl 抗原特异性抗血清，或3 μg 抗原特异性单抗，或抗质特异性杂交瘤培养上 清（克隆化细胞系来源的加30 μl，未克隆化来源的加100 μl）。然后按①，或②、或③进行操作：
（2b）按所需选用步骤4b所提供的其中之一备择物（①，②，③）预澄清放射性抗原溶液。
（4b）加入1 μl 抗原特异性抗血清，或3 μg 抗原特异性单抗，或抗质特异性杂交瘤培养上 清（克隆化细胞系来源的加30 μl，未克隆化来源的加100 μl）。然后按①，或②、或③进行操作：
①加入1：1抗Ig抗体-Sepharose偶联物胶浆/稀释缓冲液。
②加入1：1蛋白A或G-Sepharose胶浆/稀释缓冲液。
③用裂解缓冲液离心洗涤10%金黄色葡萄球菌Cowan Ⅱ菌株体浑浊液，以稀释缓冲液重悬至10%浓度，加入50 μl 此悬浊液，于4℃振荡10 min。
（5b）按基本方案洗涤免疫沉淀物，但来自①或②形成的沉淀，以200 g 离心1 min，而来自③的，1000 g 离心7 min。
（6b）加入20~50 μl SDS样品缓冲液。先不用旋涡混合器旋起混匀，否则琼脂糖或细菌会粘在液面上的管壁。盖紧盖子，在100℃保温5 min，用旋涡混合器旋起，微量离心机离心后，将混合物加样于凝胶，如基本方案步骤7进行分析。
（6b）加入20~50 μl SDS样品缓冲液。先不用旋涡混合器旋起混匀，否则琼脂糖或细菌会粘在液面上的管壁。盖紧盖子，在100℃保温5 min，用旋涡混合器旋起，微量离心机离心后，将混合物加样于凝胶，如基本方案步骤7进行分析。
来源：丁香实验
