抗Ig血清免疫沉淀放射性标记抗原

1.  按基本方案进行，但以下说明的操作步骤已经修改：

 

（2a）按每毫升加入2 μl 正常血清的量对放射性标记抗原进行预澄清处理，加入适量的抗血清，于4℃放置12~18 h， 111 000 g 离心10 min，保留上清。

 

（4a）加入1 μl 抗原特异性抗血清，3 μg 抗原持异性纯化单抗，或抗原特异性杂交瘤培养上清（克隆细胞系来源的加30 μl 或未克隆细胞系来源的加100 μl），用漩涡混合器混匀，于4℃放置2 h。然后加入合适量的抗血清，旋涡混合器混匀后，于4℃放置12~18 h。

 

（5a）按基本方案洗涤免疫沉淀物，但以1 000 g 离心7 min。

 

（6a）加入20~50 μl SDS样品缓冲液，不要旋起，否则免疫沉淀物会粘在液面上的管壁。 盖紧盖子，对免疫沉淀物、先在56℃保温1 h，然后在100℃保温5 min。将混合物加样于凝胶，如基本方案步骤7进行分析。