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        PI(PropidiumIodide 碘化丙啶)染色

        相关实验:细胞染色

        最新修订时间:

        原理

        荧光显微镜观察

        1.收集细胞,PBS 洗涤细胞一次,2000 rpm 离心 5 分钟,用 PBS 重悬细胞,调整细胞浓度约为 106 个/ml;

        2.取 100 μl 细胞悬液,加入 2-10 μl PI 染液,轻轻混匀;

        3.4℃ 避光放置 5 min 后,滴加于载玻片上,加盖玻片;

        4.荧光显微镜检测。

        流式检测:

        1.收集细胞,PBS 洗涤细胞一次,2000 rpm 离心 5 分钟,用 PBS 重悬细胞,调整细胞浓度约为 106 个/ml;

        2.500 μl 细胞悬液中加入 5 μl PI 染液;

        3.4℃ 避光放置 30 min;

        4.流式细胞仪检测。

        材料与仪器

        步骤

        荧光显微镜观察

        1.收集细胞,PBS 洗涤细胞一次,2000 rpm 离心 5 分钟,用 PBS 重悬细胞,调整细胞浓度约为 106 个/ml;

        2.取 100 μl 细胞悬液,加入 2-10 μl PI 染液,轻轻混匀;

        3.4℃ 避光放置 5 min 后,滴加于载玻片上,加盖玻片;

        4.荧光显微镜检测。

        流式检测:

        1.收集细胞,PBS 洗涤细胞一次,2000 rpm 离心 5 分钟,用 PBS 重悬细胞,调整细胞浓度约为 106 个/ml;

        2.500 μl 细胞悬液中加入 5 μl PI 染液;

        3.4℃ 避光放置 30 min;

        4.流式细胞仪检测。

        注意事项

        ●本染色液用于细胞染色分析,也可用于石蜡切片、冰冻切片、细胞涂片的检测。石蜡切片用常规方法脱蜡、分化、冰冻切片用冰丙酮固定后检测。以下以培养细胞的荧光显微镜检测为例,细胞染色可用预冷的 70% 的乙醇固定,4℃,1-2 小时,也可不固定,其他方法请参阅相关资料。

        ● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

        ●染色后请尽快检测。

        ●染色时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。

        ● PI有毒,操作时要戴上手套。

        ● 流式检测细胞凋亡时,其 DNA 可染性降低被认为是凋亡细胞的标志之一,但这种 DNA 可染性降低也可能是因为 DNA 含量的降低,或者是因为 DNA 结构的改变使其与染料结合的能力发生改变所致。在分析结果时应该注意。

        来源:丁香实验

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