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        细胞染色

        实验分类:

        细胞实验

        最新修订时间:

        简介

        细胞染色

        原理

        它不能透过完整的细胞膜,但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。

        应用

        细胞工程

        来源:丁香实验

        操作方法

        PI(PropidiumIodide 碘化丙啶)染色

        荧光显微镜观察1.收集细胞,PBS 洗涤细胞一次,2000 rpm 离心 5 分钟,用 PBS 重悬细胞,调整细胞浓度约为 106 个/ml;2.取 100 μl 细胞悬液,加入 2-10 μl PI 染液,轻轻混匀;3.4℃ 避光放置 5 min 后,滴加于载玻片上,加盖玻片;4.荧光显微镜检测。 流式检测:1.收集细胞,PBS 洗涤细胞一次,2000 rpm 离心 5 分钟,用 PBS 重悬细

        Annexin-v 染色

        1、离心收集悬浮细胞,微量离心机转速2000RPM,离心时间5min,弃培养基2、用冷PBS洗涤细胞两次3、用400ul 1X Binding Buffer悬浮细胞,浓度大约为1 X 10 cells/ml4、在细胞悬浮液中加入 5ul Annexin V-FITC,轻轻混匀后于2-8°C避光条件下孵育 15 分钟5、加入10ul PI 后轻轻混匀于 2-8°C 避光条件下孵育 5 分钟; 在 1

        细胞 JC-1 染色

        首先可将成品 JC-1 以 DMSO 配成储存液 (1~5mg/ml),储存于-20℃,用时以培养液稀释至 10ug/ml 终浓度。对贴壁细胞可以直接弃去培养液,漂洗细胞后直接加入染色液,10-30min后在荧光显微镜下或者激光共聚焦下观察。线粒体状态好时细胞以绿色为主,当红光信号增强时,红绿相叠,以橙色为主。该染色运用于悬浮细胞时还可以通过流式细胞仪进行检测,收集红/绿信号强度,计算其强度比。

        β-半乳糖苷酶活性染色方法(SA-β-gal)

        组织:(1)需要染色的组织做冰冻切片,切片复温侯,用 PBS 轻柔洗涤 3 次,每次 5 分钟。(2)用组化笔圈住组织,加入适当体积的染色固定液固定 30 分钟,体积以充分覆盖组织为宜。(3)去除染色固定液,用 PBS 洗 3 次,每次 8 分钟。(4)去除 PBS,每个组织加 30 μl SA-β-gal 染色液,最好正个切片浸泡在染色液中,可用保鲜膜封住防止蒸发,37 ℃ 孵育过夜。(5)第二

        Jurkat 细胞流式胞内染色

        Jurkat 细胞系作为实验室常用的人类 T 细胞白血病细胞系,通常用于研究免疫生物学和癌症生物学相关的问题,而流式细胞术很适合检测 T 细胞的信号水平。本方法以 TCR 的刺激后检测 pERK 水平为例。

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