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        转运反应成分的制备实验

        实验分类:

        细胞实验

        最新修订时间:

        简介

        本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。

        来源:丁香实验

        操作方法

        制备藻胆色素蛋白标志物

        1. 在一微量离心管中,4℃,10000 g 离心 APC 悬浮液 5~10 分钟,吸走上清。 2. 用 0.1 mol/L HEPES(pH 7.4),0.1 mol/L NaCl 重悬浮沉淀至浓度为 5 mg/ml。用这种缓冲液透析几次去除残留的硫酸铵。 3. 临用前用透析液溶解硫代 SMCC,浓度为 10 mg/ml。 4. 按 0.1 mg 硫代-SMCC/1 mg APC 的比例将

        胞质液的制备

        一、网状细胞和红细胞胞质液的制备 1. 自动物身上采血,每 7 ml 血加 1 ml 酸-柠檬酸盐-葡萄糖溶液(ACD;75 mmol/L 柠檬酸三钠,38 mmol/L 柠檬酸,136 mmol/L 葡萄糖,pH 5.0)。 2. 室温 500 g 离心 10 分钟收集网状细胞和红细胞。吸出血浆和白细胞层。 3. 用 1~2 倍体积的 2% 明胶(Sigma) /PBS溶液(预热至 37℃

        细胞通透化

        1. 制备用于同透化的细胞 (1) 对于在盖玻片上生长的细胞 ① 将在标准条件下培养的细胞或从组织采集的原代细胞铺在置于 6 孔培养板中的 18x18 mmol/L 的盖玻片上,生长过夜。 ② 实验前 2~4 小时,换新培养液,重新放回培养箱中。 ③ 吸出培养基,用转运缓冲液清洗细胞两次。 ④ 将细胞转入含有转运缓冲液和 40~50 μg/ml 的毛地黄皂苷的 Coplin 缸或载玻片容

        转运反应

        1. 将反应混合物加入一在冰上放置的微量离心管中。能量重建系统成分如下: 5 mmol/L 磷酸肌酸 20 单位/ml 肌酸磷酸激酶 0.5 mmol/L ATP 0.5 mmol/L GTP 2. 滴一滴孵育混合物到一片位于带盖子的湿盒中的封口膜上。将带有通透细胞的盖玻片上多余缓冲液吸去。倒置于孵育液滴上。对所有样品, 重复该步骤。对于悬浮培养细胞,可在一微量离心管中反应,细胞可以通过

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